铁皮石斛种子的小苗计数法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105325297A(43)申请公布日2016.02.17(21)申请号201510781009.5(22)申请日2015.11.13(71)申请人广西壮族自治区药用植物园地址530023广西壮族自治区南宁市兴宁区长堽路189号(72)发明人蒙爱东闫志刚林伟缪剑华黃名埙(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司45104代理人杨立华(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称铁皮石斛种子的小苗计数法(57)摘要本发明公开了一种铁皮石斛种子的小苗计数法，将铁皮石斛的种子萌发生长成小苗，通过计算小苗的数量得到种子的数量。由于该法系将细微、难以采用常规的、直接肉眼分辨计数的铁皮石斛蒴果中的种子播在培养基表面，利用配制培养基丰富的营养成份，为铁皮石斛种子萌发及生长提供养料和水分，确保其蒴果保存的种子在培养基上基本可以成活，并让种子萌发生长成肉眼能清楚分辨和计数的一定大小的小苗，使之能直观、简便计数，则通过计数小苗数量即可得到种子的数量。本发明使用简便、实用性强、不需要借助其他较精密的显微仪器设备，就可以准确计数铁皮石斛蒴果中的种子数量，从而方便得出生产种苗的数量，这为大规模育苗和生产提供准确的指导和参考。CN105325297ACN105325297A权利要求书1/1页1.一种铁皮石斛种子的小苗计数法，其特征在于将铁皮石斛的种子萌发生长成小苗，通过计算小苗的数量得到种子的数量。2.根据权利要求1所述的铁皮石斛种子的小苗计数法，其特征在于将铁皮石斛蒴果中的种子播在培养基表面使其萌发生长成小苗。3.根据权利要求2所述的铁皮石斛种子的小苗计数法，其特征在于：所述培养基组成为MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+200g/L马铃薯浸出液+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH5.8。4.根据权利要求3所述的铁皮石斛种子的小苗计数法，其特征在于：所述小苗平均株高大于等于5.0mm。5.根据权利要求4所述的铁皮石斛种子的小苗计数法，其特征在于包括以下步骤：<1>培养基制备按配方制备培养基，并用直径6cm、高10cm的平底玻璃瓶分装，每瓶装25ml，然后置121℃、1.1kg/cm2的压力下灭菌20min，待用；<2>种子处理铁皮石斛蒴果依次用洗洁精水溶液浸泡5min、自来水冲洗15-30min，然后在超净工作台上放入1g/LHgCl2溶液中灭菌15min，无菌水冲洗5次后，无菌滤纸吸干果实表面水分，待用；<3>种子播种将蒴果中的种子接入培养基表面；<4>种子培养将接好的培养基放25℃培养室内，在辅助光照10-12小时/天、光照强度1500lux条件下培养；<5>种子计数待种子长成小苗，平均株高达5.0mm，取出全部小苗计数，得到蒴果中种子的数量。2CN105325297A说明书1/3页铁皮石斛种子的小苗计数法技术领域[0001]本发明属于植物细微种子快速计数技术领域，尤其涉及一种铁皮石斛种子的小苗计数法。背景技术[0002]铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)，兰科石斛属多年生草本植物，常用中药，为《中华人民共和国药典》所收载。分布于我国秦岭、淮河以南诸省区，生长在高山峻岭悬崖峭壁和岩石缝隙或深山古树上。铁皮石斛具有生津、止渴、镇痛、消除水肿之功效，主治热病阴虚、目暗、胃弱、声音嘶哑等疾病，对声带疲劳、声音嘶哑，恢复其美音有特殊疗效。铁皮石斛为濒危物种，属国家一级重点保护植物，其新鲜茎及炒制烘干后的铁皮枫斗都是名贵中药材。现代临床应用和药理研究证实，铁皮石斛具有滋阴润肺、养胃生津、健脑明目、保肝宁心、清热降火、补五脏之虚劳、轻身延年的神奇功效，对慢性疲劳综合症、肺病、冠心病、肾病、慢性肝病、高血压、高血脂、高血糖、糖尿病、慢性胃病、干燥综合症、癌症等疾病都有确切疗效和调理康复作用；增强肌体免疫力、抗氧化、抗衰老，对烟酒过度、劳累过度、夜生活过度、用眼用脑过度、声音嘶哑、口干舌燥、年老性体弱力衰阴虚等康复有特殊疗效。[0003]铁皮石斛在自然状态下发芽率不及5％，繁殖率非常低，多以分株法繁殖，难以满足市场需求。现在铁皮石斛主要以种子为外植体，进行组织培养生产试管苗的方式进行繁育。铁皮石斛种子主要存在于蒴果中，蒴果长约1.8～2.2cm、直径0.5～0.8cm，内含有几万至十几万粒种子，细小如粉尘状，在显微镜下观察到种子结构非常简单，仅有一个简单的胚及单层细胞的翘状种皮结构，无胚乳，种子长×宽平均为126×84μm。由于铁皮石斛的种子很细微，很难把种子分离开来，用常规方法难以准确计数蒴果所含种子量，且种子在自然状态下不易保存，很容易失活。发明内容[0004]本发