固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105911179A(43)申请公布日2016.08.31(21)申请号201610235140.6(22)申请日2016.04.15(71)申请人广西壮族自治区梧州食品药品检验所地址543000广西壮族自治区梧州市西环路中段198号(72)发明人陈学松罗达龙王华(74)专利代理机构广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙)44295代理人黄为蔡国(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法(57)摘要本发明提供了一种固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法，旨在提供一种灵敏度高，定性定量准确的固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法；该方法依次包括下述步骤：1)标准溶液的制备；2)样品前处理；3)样品净化；将上述样品前处理液，以1ml/min流速通过HLB固相萃取柱，用5ml水淋洗，弃去，再用5ml甲醇洗脱收集洗脱液，洗脱液于40℃下氮吹至近干，精密加入1ml甲醇溶解，用0.22μm有机滤膜过滤，即得待测样品上色谱柱检测；属于化学检测技术领域。CN105911179ACN105911179A权利要求书1/1页1.一种固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：1)标准溶液的制备标准储备液：精密称取标准物质10mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，使成浓度为1mg/ml；标准稀释液：精密吸取标准溶液0.2ml，置100ml的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，使成浓度为2μg/ml1；标准工作曲线：取标准稀释液液适量加甲醇，分别配制成浓度为0.01、2、5、10、20ng/ml标准工作液；2)样品前处理红曲色素粉0.5g，置10ml锥形瓶中，加3ml1％甲酸-甲醇溶液，80℃加热回流30min，冷却，过滤，滤液转移至25ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀后过滤，待用；3)样品净化将上述样品前处理液，以1ml/min流速通过HLB固相萃取柱，用5ml水淋洗，弃去，再用5ml甲醇洗脱收集洗脱液，洗脱液于40℃下氮吹至近干，精密加入1ml甲醇溶解，用0.22μm有机滤膜过滤，即得待测样品；4)液相色谱与质谱条件色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlus柱2.1×50mm，1.8μm；流动相A为0.1％甲酸，流动相B为乙腈，采用梯度洗脱程序如下：0-4.0min，A、60-20％，B、40-80％；4.0-5.5min，A、10％，B、90％；5.5.-5.6min，A、70％，B、30％；流速0.3ml/min；柱温40℃；进样量2μl；电喷雾源ESI，正离子方式，选择多反应监测MRM，载气温度：150℃，载气流量：15L/min，雾化器压力40psi，鞘气温度350℃，鞘气流量：12L/min，毛细管电压3500V，定性定量离子：母离子m/z＝251.2，子离子m/z233.2和m/z205.2，碰撞能量分别为5V和20V，Frag均为380V。2CN105911179A说明书1/4页固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法技术领域[0001]本发明提供一种桔霉素的检测方法，具体的说是一种固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法；属于化学检测技术领域。背景技术[0002]桔霉素(citrinin)是1931年首次从青霉菌Penicilliumcitrinum中分离得到。其分子式为C13H14O5，分子量为250.25。桔霉素有一定的肾毒性和肝毒性，能致畸、引发肿瘤及诱发突变。而红曲是中国传统药材，是用特有的红曲霉菌在大米中培养发酵而成。因某些红曲霉菌株能产生具有抑制胆固醇生物合成的他汀类物质，因而中药红曲被开发为降血脂的红曲色素粉和保健食品。在1995年法国学者Blanc等首次发现了红曲产品中含有桔霉素后，国外已将桔霉素作为食品污染的严格控制指标。而在中国，中国药典尚未将桔霉素作为含红曲中成药的控制指标。[0003]对于红曲色素粉——红曲色素粉有文献记载用RP-HPLC法测定其桔霉素含量，而在食品、保健食品中也有桔霉素的检测方法：薄层层析法、荧光分光光度法、高效液相色谱法等。发明内容[0004]针对上述不足，本发明的目的是提供一种灵敏度高，定性定量准确的固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法。[0005]为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：[0006]一种固相萃取-液质串联检测红曲色素粉中的桔霉素的方法，依次包括下述步骤：[0007]1)标准溶液的制备[0008]标准储备液：精密称取标准物质10mg，置10