土壤真菌分离和计数方法的探讨.pdf

,2000-10,31(5):515-518JournalofShenyangAgriculturalUniversity,2000-10,31(5):515-518土壤真菌分离和计数方法的探讨梁晨,吕国忠(沈阳农业大学植保系,辽宁沈阳110161)摘要:综述了分离土壤真菌的方法以及测定土壤真菌的间接计数法和直接计数法;介绍了常见的分离和计数培养基;评价了各种方法和培养基的优缺点;并着重讨论了各种分离和计数方法的应用。关键词:土壤真菌;分离;计数;培养基中图分类号:S432.4+4文献标识码:A文章编号:1000-1700(2000)05-0515-04ApproachonIsolationandEnumerationMethodsofSoilFungiLIANGChen,LUGuo-zhong(DepartmentofPlantProtection,ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang110161,China)Abstract:Thatofisolationmethodsforsoilfungiandtheindirectanddirectenumerationmethodsformeasuringsoilfungi;wasre2viewed.Authorslistedcommonmediaforenumerationandisolation;valuedtheadvantagesanddisadvantagesoftheoffungiofmeth2odsandmedia;andfocusedondiscussingtheapplicationofthesemethodsforisolationandenumeration.Keywords:soilfungi;isolation;enumeration;medium60年代以来,微生物生态学研究发展较快,推动了土壤微生物学的研究,人们的兴趣转向了解土壤中真菌存在的形式、数量、活性以及它们在物质转化中的重要作用。80年代后,由于逐渐采用新研究技术和手段,使土壤微生物的发展进入了一个新时期,土壤微生物生态学的发展在很大程度上依赖于研究方法的改进和更新。土壤真菌作为土壤微生物区系的重要组成部分,虽然与其它组分(细菌、放线菌)有着共性,但也具有其特殊性,因此对土壤真菌研究方法的探讨尤具意义[1～3]。土壤真菌包括分布广泛的土壤习居菌和分布局限的土壤寄居菌,土壤真菌区系的研究对于衡量和维持生物多样性以及研究和防治土传性病害都具有重要意义。由于真菌在土壤中的存在状态的多样性和分布的不均匀性以及土壤本身理化性质的影响,对于如何反映土壤真菌区系全貌的分离和计数方法需要做进一步的评价[4,5]。1土壤真菌的分离方法1.1分离方法土壤真菌的分离可采用稀释平板法、土壤淋洗法、孢子悬浮法、土壤平板法、钟形撒粉器法、平板插入筛选法、插入管法、菌丝分离法、植物残渣法、直接分离法、捕捉法、湿筛法、漂浮法和蒸气法[6～14]。其中稀释平板法用于分离产孢能力较高的半知菌、子囊菌和接合菌,例如青霉属、曲霉属、拟青霉属、粘帚霉属、镰孢属、枝顶孢属和枝孢属,很少分离到担子菌和无孢子真菌。土壤平板法适用于分离在土壤中以菌丝状态存在的真菌,具有简便易行的特点。植物残渣法适用于稀释平板法或土壤平板法不能分离的真菌,例如立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)。湿筛法和漂浮法用于分离产生孢子囊的真菌。捕捉法可用于分离腐霉属、疫霉属和丝核菌属。冲洗土粒法[15]适用于分离腐霉属、疫霉属、木霉属、枝顶孢属、镰孢属和毛壳菌属。钟形撒粉器法可用来分离镰孢属。平板插入筛选法或插入管法适用于分离丝核菌属和葡萄孢属。蒸气法用于分离土壤中的子囊菌。此外,也可采用菌丝分离法和直接分离法来分离不易产孢的真菌。收稿日期:2000-08-26基金项目:辽宁省科委博士起动基金资助项目(961046)作者简介:梁晨(1971-),女,莱阳农学院讲师,沈阳农业大学植保系硕士研究生,从事植物病理学与土壤真菌学的教学和科研工作。●研究报告RESEARCHREPORT516・沈阳农业大学学报第31卷1.2培养基土壤内真菌种类繁多,它们的营养需要不同,因此常采用多种不同的培养基作营养物质过筛培养。一般采用的培养基有无碳培养基、无碳培养基加氨基酸、维生素、棉花纤维或植物组织、洋麻培养基以及孟加拉红培养基等十几种培养基。其中孟加拉红琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基(PDA)、麦芽浸汁琼脂培养基(MEA)和牛胆汁琼脂培养基可兼用于土壤真菌的分离和计数[16]。孟加拉红琼脂培养基是一种组合培养基,成分准确,其上发育的真菌数量及种类较多,放线菌及大部分细菌易被孟加拉红和链霉素所抑制,但真菌菌落较小,是最常用的土壤真菌分离和