一种分离纯化鼠李糖脂的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109180746A(43)申请公布日2019.01.11(21)申请号201811071939.1(22)申请日2018.09.14(71)申请人南京工业大学地址211816江苏省南京市浦口区浦珠南路30号(72)发明人董维亮薛瑞周杰姜岷徐宁(74)专利代理机构江苏致邦律师事务所32230代理人徐蓓尹妍(51)Int.Cl.C07H1/06(2006.01)C07H15/04(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种分离纯化鼠李糖脂的方法(57)摘要本发明涉及到一种分离纯化鼠李糖脂的方法，采用离心的方法去除菌体，收集上清液，然后将收集的上清液，加入发酵液体积10%乙醇沉淀蛋白，采用离心的方法去除沉淀的蛋白，收集上清液，加入磷酸调节pH使鼠李糖脂析出，产生沉淀；之后经过离心收集鼠李糖脂沉淀。最后向石油醚中打撒鼠李糖脂沉淀，让鼠李糖脂均匀的分散于石油醚中，溶解鼠李糖脂中的杂质，离心收集沉淀得到提纯的鼠李糖脂。采用本发明的方法最终鼠李糖脂回收率为91.82%，鼠李糖脂纯度为85%。与现有的技术相比，本发明的方法具有操作简单，回收率高，无毒安全的特点，是一种工艺简单，适合工业化的批量生产的简便，经济，高效的方法。CN109180746ACN109180746A权利要求书1/1页1.一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将鼠李糖脂发酵液置于离心管中离心富集菌体，收集无菌的发酵液上清液；（2）在步骤（1）收集的发酵液上清液中加入无水乙醇；（3）将步骤（2）中加入无水乙醇的发酵液上清液加入磁力搅拌子，放置于磁力搅拌器上搅拌；（4）将（3）中搅拌处理后的溶液置于离心管中离心富集沉淀蛋白，收集去除蛋白的上清液，即去除蛋白的鼠李糖脂发酵液；（5）在（4）中收集的去除蛋白的鼠李糖脂发酵液中加入磷酸调节pH使鼠李糖脂析出，产生沉淀，静置一段时间；（6）将（5）中产生沉淀的发酵液置于离心管中离心富集鼠李糖脂沉淀，舍弃上清液，将产生的沉淀烘干，得到鼠李糖脂沉淀产品；（7）将（6）中得到的鼠李糖脂沉淀产品均匀的打撒于石油醚中，溶解鼠李糖脂中的杂质；（8）将（7）中石油醚和鼠李糖脂沉淀产品混合物置于离心管中离心，使固液分离，收集鼠李糖脂固体，得到提纯的鼠李糖脂产品。2.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，将鼠李糖脂发酵液在10000rpm，4℃条件下离心20min。3.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述离心管为尖底离心管。4.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，无水乙醇的添加量为鼠李糖脂发酵液体积的10%。5.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，搅拌的条件为250rpm搅拌9h。6.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（4）、步骤（6）和步骤（8）中，将鼠李糖脂发酵液在6000rpm，4℃条件下离心10min。7.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（5）中所用的磷酸为分析纯级别磷酸；加磷酸调节pH至2。8.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（5）中，在4℃下静置18h。9.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，所述步骤（7）中，鼠李糖脂沉淀产品和石油醚的质量体积比为1/2~1/8（w/v）。10.根据权利要求1所述的一种分离纯化鼠李糖脂的方法，其特征在于，还包括：取步骤（1）发酵液上清液、步骤（4）去除蛋白的鼠李糖脂发酵液、步骤（6）酸沉淀后的上清液和步骤（8）固液分离后的石油醚洗涤液，加入定量蒽酮硫酸试剂，沸水浴反应10min，控制紫外波长为620nm，利用酶标仪测试发酵液吸光度，代入用标准鼠李糖制作的标准曲线中计算鼠李糖脂浓度，计算鼠李糖脂损失率。2CN109180746A说明书1/5页一种分离纯化鼠李糖脂的方法技术领域[0001]本发明涉及到一种分离纯化方法，尤其是鼠李糖脂的分离纯化方法。背景技术[0002]鼠李糖脂是目前研究较多的一种生物表面活性剂，具有乳化、增溶和降低界面张力等功能，且低毒、易生物降解，在石油化工、生物医药、食品卫生及环境保护等领域有良好应用前景。然而鼠李糖脂的分离成本制约着其使用成本，因为鼠李糖脂的下游分离成本通常占其生产成本的60%。目前关于鼠李糖脂的分离多处于实验室阶段，很少有形成工业化的规模。[0003]目前对鼠李糖脂的研究多集中于提高产率上及其应用效果上，在提取工艺方面的研究较少。现有的工艺主要包括萃取法，活性炭吸附法，这