一种幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109251247A(43)申请公布日2019.01.22(21)申请号201811010962.X(22)申请日2018.08.31(71)申请人菏泽睿智科技开发有限公司地址274000山东省菏泽市牡丹区北城薛楼(72)发明人李辉于海勤刘艳平吴桂平李文娇(74)专利代理机构济南泉城专利商标事务所37218代理人张贵宾(51)Int.Cl.C07K16/12(2006.01)C07K16/02(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法(57)摘要本发明涉及生物制品及分离技术领域，特别公开了一种幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法。该提取方法通过水稀释法初步提取后，利用阴离子交换层析、嗜硫亲和层析（或疏水层析）两步组合，经除盐浓缩、浓缩液冷藏或冻干成粉，最终获得高品质的IGY抗体成品。本发明步骤简单，产品纯度好，收率高，最大程度保证了产品的安全性，并且克服了传统盐析、聚乙二醇沉淀法及采用单一阴离子交换层析法的缺陷，可有效解决成本高、废液处理难的问题，适合工业化生产应用。CN109251247ACN109251247A权利要求书1/1页1.一种幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，以含有幽门螺旋杆菌卵黄抗体的鸡蛋为处理对象，其特征为，包括如下步骤：（1）将鸡蛋清洗后浸泡体积浓度为75%的乙醇溶液中消毒30min；（2）收集鸡蛋的卵黄，用4-9倍体积的纯化水稀释，室温下搅拌30min，调整pH为4.5-5.5，于2-6℃下冷藏10-24h，离心卵黄溶液，收集上清液；（3）将上清液调整为pH5.0-8.0、0.02M的磷酸盐缓冲液，利用弱碱性阴离子填料吸附，吸附量为60-100mg/mL，流速为3BV/h，吸附完毕后，用2-4BV体积、pH5.0-8.0、0.02M的磷酸盐缓冲液冲洗；（4）用氯化钠溶液进行线性洗脱，收集部分洗脱液；（5）将收集的洗脱液用盐溶液调整为1-0.8M浓度，同时调节pH值为6.0-8.0，利用层析填料进行吸附，蛋白吸附量为20-30mg/mL，流速为3BV/h，吸附完毕后用2-3BV、1-0.8M的盐溶液冲洗，冲洗体积为2-3BV；（6）利用盐溶液进行层析线性洗脱，收集部分洗脱液；（7）用1000-100000Da的超滤膜对洗脱液进行脱盐浓缩，中间加去离子水3-5次，至导电率小于30us/cm，浓缩液冷藏或冻干成粉，即得产品。2.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：所述含有幽门螺旋杆菌卵黄抗体的鸡蛋为CagA阳性幽门螺旋杆菌抗原免疫蛋鸡所产的鸡蛋。3.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：步骤（2）中，卵黄溶液在8000-10000rpm/min、6℃条件下离心30min，收集上清液。4.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：步骤（3）中，上柱前的上清液调整为pH6.5、0.02M的磷酸盐缓冲液，弱碱性阴离子填料为DEAE填料或琼脂糖凝胶。5.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：步骤（4）中，氯化钠溶液的线性洗脱浓度为0-1M，总洗脱体积为40-60BV，收集的洗脱段为0.05-0.3M。6.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：步骤（5）中，层析填料为嗜硫亲和层析填料或疏水层析填料，嗜硫亲和层析填料功能基团为2-巯基吡啶，疏水层析填料的功能基团为苯基、短链烷基、烷氨基、聚乙二醇和聚醚中的一种。7.根据权利要求6所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：步骤（5）和（6）中，盐溶液为硫酸铵、硫酸钠和氯化钠溶液中的一种，盐溶液的层析线性洗脱浓度为0-1M，洗脱总体积为8BV，嗜硫亲和层析填料的收集洗脱段为0.4-0.02M，疏水层析填料的收集洗脱段为0.4-0.08M。8.根据权利要求4所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：所述弱碱性阴离子填料为琼脂糖凝胶。9.根据权利要求6所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：所述疏水层析填料的功能基团为烷氨基或聚乙二醇。10.根据权利要求7所述的幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法，其特征在于：所述盐溶液为硫酸铵溶液。2CN109251247A说明书1/4页一种幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法[0001]（一）技术领域本发明涉及生物制品及分离技术领域，特别涉及一种幽门螺旋杆菌卵黄抗体的提取方法。[0002]（二）背景技术幽门螺杆菌（HP）是唯一能够在人类胃部生长存活的微生物，通过口口、粪口、食物等方式进行传播，侵入人体后定植在胃底和十二指肠黏膜上皮组织表面。目前我国有50%以上的人口呈幽门螺杆菌阳