一种从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109439584A(43)申请公布日2019.03.08(21)申请号201811371823.X(22)申请日2018.11.15(71)申请人广东省农业科学院农业生物基因研究中心地址510640广东省广州市天河区金颖路20号创新大楼(72)发明人王志林陈庄朱翠蒋宗勇贝锦龙俞婷王蕾吴秀菊叶金玲(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245代理人崔红丽(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12R1/19(2006.01)权利要求书2页说明书4页(54)发明名称一种从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法(57)摘要本发明公开一种从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，属于生化工程后处理技术领域。本发明首先将大肠杆菌发酵液pH值调整至合适范围，然后加入天然安全无毒絮凝剂和促凝剂溶液，充分搅拌使絮凝剂与发酵液中细胞结合并絮凝成团，静置一段时间后移去上层清液，回收下层富含细菌的絮团沉积液。通过这种絮凝沉积方法，可使大肠杆菌发酵液浓缩至原体积1/5～1/10，细菌回收率达90％以上，最高可达98％。本发明通过往发酵液中添加絮凝剂方式使发酵液中大肠杆菌细胞絮凝成团并快速沉降浓缩，可从发酵液中快速回收高浓度菌体，该方法可减少传统喷雾干燥工艺蒸发量，可大大减少设备投资，节省后处理时间，降低生产成本。CN109439584ACN109439584A权利要求书1/2页1.一种从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于是通过往大肠杆菌发酵液添加絮凝剂和促凝剂使细胞快速絮凝成团沉积；包括如下步骤：首先用酸碱溶液调节大肠杆菌发酵液pH值至5.0～7.0，再往调整好pH值的大肠杆菌发酵液中加入20ml/L～60ml/L壳聚糖溶液，采用较快速度搅拌2～3min，搅拌转速120～150rpm，使壳聚糖与发酵液充分混合均匀，之后加入10ml/L～40ml/L海藻酸钠溶液，缓慢搅拌，使菌体与壳聚糖絮凝成团，静置沉降包含菌体的絮团，收集底层富含大肠杆菌菌体浓缩液。2.根据权利要求1所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：所述的壳聚糖溶液的浓度为1％～2％。3.根据权利要求1所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：所述的海藻酸钠溶液的浓度为0.5％～2.0％。4.根据权利要求1所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：用酸碱溶液调节大肠杆菌发酵液pH值至6.0～7.0。5.根据权利要求1所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：所述的大肠杆菌包括E.coliDH5α、E.coliBL21(DE3)、E.coliJM109、E.coliHB101、E.coliTOP10。6.根据权利要求1所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：所述的壳聚糖溶液的添加量为40ml/L，所述的海藻酸钠溶液的添加量为20ml/L。7.根据权利要求1所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：所述的壳聚糖溶液和海藻酸钠溶液添加顺序为先添加壳聚糖溶液与发酵液充分搅拌混合均匀生成絮状小颗粒，之后再加入海藻酸钠溶液缓慢搅拌形成块状絮团，搅拌转速以50～60rpm为宜。8.根据权利要求1或7所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：所述的缓慢搅拌的时间为2～5min。9.根据权利要求1所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：所述的静置的时间为15～30min。10.根据权利要求1所述的从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法，其特征在于：所述的收集底层富含大肠杆菌菌体浓缩液，是待包裹细菌的絮团沉降后，直接从上层移去清液，回收下层的菌体溶液，作进一步处理；或者从底层放出菌体悬浊液，将悬浊液再2CN109439584A权利要求书2/2页静置沉淀10～30min后吸走上层清液，收集下层沉积菌体。3CN109439584A说明书1/4页一种从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法技术领域[0001]本发明属于生化工程后处理技术领域，具体涉及一种从大肠杆菌发酵液中快速回收大肠杆菌细胞的方法。背景技术[0002]大肠杆菌(Escherichiacoli)是迄今为止研究最详尽的原核生物，大肠杆菌具有遗传背景清楚，繁殖迅速，培养条件简单，代谢易于控制，易进行工业化大规模生产，是一种常用的基因工程宿主菌，拥有不同的宿主菌和质粒载体。目前大肠杆菌作为基因工程宿主菌已被用于表达各种蛋白或复制质粒，已被广泛应用于酶、抗体、疫苗的工业生产及科研院校制备科研用重组蛋白。大肠杆菌表达重组蛋白主要有5种