基于微流控和免疫磁分离双重策略的痕量细胞捕获系统.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109486653A(43)申请公布日2019.03.19(21)申请号201811413397.1(22)申请日2018.11.27(71)申请人上海昆道生物技术有限公司地址201201上海市浦东新区川沙路1666弄83号302申请人蓝怡科技集团股份有限公司(72)发明人张鹏飞韩焕兴(51)Int.Cl.C12M1/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称痕量目标细胞的回收率。基于微流控和免疫磁分离双重策略的痕量细胞捕获系统(57)摘要本发明属于细胞分离分析技术领域，具体涉及一种基于微流控和免疫磁分离双重策略的痕量细胞捕获系统。该系统包括螺旋式微流控芯片和包含磁铁的芯片托，微流控芯片包括样本入口（11）、鞘液入口（12）、螺旋式流道（13）、痕量细胞收集出口（14）和废液口（15）；所述的螺旋式流道由单螺旋式通道构成，所述单螺旋型通道的入口位于圆形螺旋通道的中心附近，经半圆形起始通道进入螺旋形微流道，流道末端包含2个出口，分别收集样品中的痕量细胞和废液。所述的芯片托用于固定芯片，包括芯片托底座（21）、芯片凹槽（22）、芯片固定弹片（23）和磁铁（25），圆形磁铁固定在芯片托的凹槽中，位置对应芯片的螺旋流道中心位置。本发明方法提供的痕量细胞捕获系统，首次将单螺旋微流控芯片和免疫磁分离相结合，可以同时利用细胞大小、密度和表面标志物CN109486653A形成双策略细胞分离系统，提高真实复杂样本中CN109486653A权利要求书1/1页1.一种基于微流控和免疫磁分离双重策略的痕量细胞捕获系统，该系统包括螺旋式微流控芯片和包含磁铁的芯片托；所述的微流控芯片包括样本入口（11）、鞘液入口（12）、螺旋式流道（13）、痕量细胞收集出口（14）和废液口（15）；所述的螺旋式流道由单螺旋式通道构成，所述单螺旋型通道的入口位于圆形螺旋通道的中心附近，经半圆形起始通道进入螺旋形微流道，流道末端包含2个出口，分别收集样品中的痕量细胞和废液。所述的芯片托用于固定芯片，包括芯片托底座（21）、芯片凹槽（22）、芯片固定弹片（23）和磁铁（25），圆形磁铁固定在芯片托的凹槽中，位置对应芯片的螺旋流道中心位置。2.根据权利要求1所述的一种痕量细胞微流控芯片捕获系统，其特征在于所述微流控芯片由上层PDMS或者PMMA聚合物芯片和下层玻璃片或者硅片封接而成，或者采用PC塑料注塑而成。3.根据权利要求1所述的一种痕量细胞微流控芯片捕获系统，其特征在于所述的微流控芯片中螺旋式流道（13）宽度为100-1000微米，高度为50-200微米，样品入口（11）流道宽度为100-200微米，鞘液入口（12）流道宽度为400-800微米，样品入口/鞘液入口流道宽度比例为1:5-1:9，芯片流道末端，痕量细胞出口（14）流道宽度为100-200微米，废液出口（15）流道宽度为400-800微米，痕量细胞出口/废液出口流道宽度比例为1:5-1:10。4.根据权利要求1所述的一种痕量细胞微流控芯片捕获系统，其特征在于所述的微流控芯片各出入口和外接导管连接，样品和鞘液通过注射泵或者压力泵装置将液体恒速注入芯片系统，其中注射样品的流速为0.5-2mL/h，注射鞘液的流速为2.5-50mL/h。5.根据权利要求1所述的一种痕量细胞微流控芯片捕获系统，其特征在于所述的微流控芯片托由PMMA塑料或者其他非铁质材料制成，芯片托具有和与芯片下层同样大小玻片或者硅片同样尺寸的凹槽，芯片由夹子固定在芯片托中。6.根据权利要求1所述的一种痕量细胞微流控芯片捕获系统，其特征在于所述生物样品可以为外周血、胸腔积液、腹腔积液、脑脊液、骨髓液或尿液。7.根据权利要求1所述的一种痕量细胞微流控芯片捕获系统，其特征在于所述痕量细胞微流控捕获系统的使用方法，包括以下步骤：（1）将待测血液或者其他体液进行红细胞裂解或者前处理后，加入PBS缓冲液，然后样本中加入包被有抗体的磁珠，室温孵育0.5-2h，作为进样样品。（2）利用注射泵或压力泵装置，分别将步骤（1）处理后的样本和缓冲液经导管从芯片的样本入口和鞘液入口注入芯片内，部分细胞根据的大小和密度的差异在单螺旋芯片内实现痕量细胞惯性聚焦分离，部分细胞根据细胞表面标志物的表达在芯片内实现痕量细胞的免疫磁分离。（3）两种策略分离出的痕量细胞都从出口流出，非目标细胞从废液口流出。2CN109486653A说明书1/4页基于微流控和免疫磁分离双重策略的痕量细胞捕获系统技术领域[0001]本发明属于细胞分离技术领域，具体涉及一种微流控芯片和免疫磁分离双重策略的痕量细胞捕获方法。背景技术[0002]液体活检技术通过从病人的外周血、脑脊液或者骨髓等体液中选择性分离稀少的