一种重组人铁蛋白分离纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109503704A(43)申请公布日2019.03.22(21)申请号201811622011.8(22)申请日2018.12.28(71)申请人平湖优谱生物技术有限公司地址314200浙江省嘉兴市平湖市永兴路1985号(72)发明人崔晴晴张洪时鑫倪春杰(74)专利代理机构杭州五洲普华专利代理事务所(特殊普通合伙)33260代理人龚玉平(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/20(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图6页(54)发明名称一种重组人铁蛋白分离纯化方法(57)摘要本发明公开了一种重组人铁蛋白分离纯化方法，包括以下步骤：发酵后的大肠杆菌菌液离心后获得菌泥，菌泥溶解于缓冲液后进行加热、离心或过滤处理，得滤液；利用阴离子层析对步骤1)得到的滤液进行分离，收集含目的蛋白的洗脱缓冲液；利用阳离子层析对步骤2)得到含目的蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集含目的蛋白的洗脱缓冲液；利用疏水层析对步骤3)得到的含目的铁蛋白的洗脱缓冲液进行三次分离，收集含目的蛋白的洗脱缓冲液。本发明具有操作简便，目的蛋白回收率高，纯度高等优点。CN109503704ACN109503704A权利要求书1/2页1.一种重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：1)发酵后的大肠杆菌菌液离心后获得菌泥，菌泥溶解于缓冲液后进行加热、离心或过滤处理，得滤液；2)利用阴离子层析对步骤1)得到的滤液进行分离，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液；3)利用阳离子层析对步骤2)得到含铁蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液；4)利用疏水层析对步骤3)得到的含铁蛋白的洗脱缓冲液进行三次分离，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液。2.如权利要求1所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中溶解菌泥的缓冲液为5-100mMPB或TrispH7.0，所述步骤1)中加热的温度范围和时间分别为70-75℃、5-15min，所述步骤1)中过滤处理采用0.22um中空纤维或滤膜过滤处理方式。3.如权利要求1所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤2)具体为：取装有阴离子层析介质的层析柱，用0.5MNaOH处理层析柱，之后用结合缓冲液平衡层析柱后上样，再用清洗缓冲液清洗杂质，用洗脱缓冲液进行洗脱，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液，用0.5MNaOH清洗结合能力比较强的杂质，用10mMNaOH保存层析柱。4.如权利要求3所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤2)中阴离子层析介质为QBestaroseHighPerformance、QSepharoseHighPerformance、DEAEBestaroseHighPerformance、DEAESepharoseHighPerformance、SOURCEQ、QBestaroseFastFlow、QSepharoseFastFlow、DEAEBestaroseFastFlow、DEAESepharoseFastFlow、QBestaroseBigBeads、QsepharoseBigBeads、QBestaroseBigBeads、QsepharoseBigBeads、DiamondQ、CaptoQ、DiamondQmustang、CaptoQmustang、CaptoDEAE、DiamondDEAE或DiamondDEAEmustang中的一种；所述步骤2)中结合缓冲液为5-100mMPB或TrispH7.0；所述步骤2)中清洗缓冲液为5-100mMPB或MESpH6.0或5-100mMPB或Tris0.1MNaClpH7.0中的一种；所述步骤2)中洗脱缓冲液为5-100mMNaACpH4.5或5-100mMPB0.25MNaClpH7.0；所述步骤2)中结合缓冲液平衡层析柱至流出液的PH和电导均与结合缓冲液的PH和电导保持一致。5.如权利要求1所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤3)具体为；取装有阳离子层析介质的层析柱，用0.5MNaOH处理层析柱，之后用结合缓冲液平衡层析柱后上样，洗脱缓冲液进行洗脱，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液，用0.5MNaOH清洗结合能力比较强的杂质，用10mMNaOH保存层析柱。6.如权利要求5所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤3)中阳离子层析介质为SPBestaroseHighPerformance、SPSepharoseHighPerformance、DiamondMMC、CaptoMMC、DiamondMMCmustang