一种牡蛎多糖及其提取方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109554417A(43)申请公布日2019.04.02(21)申请号201811570887.2(22)申请日2018.12.21(71)申请人北京颐方生物科技有限公司地址100043北京市石景山区实兴大街30号院3号楼2层A-1078房间(72)发明人石清东王姣王正元(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君陈征(51)Int.Cl.C12P19/16(2006.01)C12P19/04(2006.01)C08B37/00(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书2页说明书9页(54)发明名称一种牡蛎多糖及其提取方法和应用(57)摘要本发明涉及一种牡蛎多糖及其提取方法和应用。所述提取方法包括将牡蛎肉进行酶解反应时，使用的酶包括枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶，所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量比为(1-5)：(5-1)；还可以进一步包括异淀粉酶，所述异淀粉酶与所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶总量的用量比为(0.5-2)：(2-10)。本发明具有以下有益效果：本发明方法获得的牡蛎多糖收率高、纯度高。所得牡蛎多糖对肿瘤细胞具有非常显著的抑制作用。所提供的方法简单易行，节约资源，原料易得。CN109554417ACN109554417A权利要求书1/2页1.一种牡蛎多糖的提取方法，其特征在于，将牡蛎肉进行酶解反应时，使用的酶包括枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量比为(1-5)：(5-1)；优选地，所述用量比为(1-2)：(1-2)。3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述酶解反应时，所使用的酶还包括异淀粉酶；优选地，所述异淀粉酶与所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶总量的用量比为(0.5-2)：(2-10)。4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述异淀粉酶是所述枯草杆菌蛋白酶的(0.5-2)：(1-5)；和/或，是所述米曲霉蛋白酶的(0.5-2)：(1-5)。5.根据权利要求1-4任一项所述的提取方法，其特征在于，所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量是所述牡蛎肉的2-10％；和/或，所述异淀粉酶的用量是所述牡蛎肉的0.5-2％；优选地，所述异淀粉酶的用量是所述牡蛎肉的0.8％-1.5％。6.根据权利要求1-5任一项所述的提取方法，其特征在于，所述酶解反应包括第一酶解反应和第二酶解反应；先以所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶进行所述第一酶解反应，再以所述异淀粉酶进行所述第二酶解反应；优选地，所述第一酶解反应中，将牡蛎肉匀浆调节pH值6-8，在30-50℃下，以所述枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶解1-4小时后，升温80-90℃，保持5-10分钟后，降温20-40℃，离心取清液，再进行所述第二酶解反应；和/或，所述第二酶解反应中，需调整清液pH值至6.5-7.0，酶解温度为30-50℃，酶解反应2-6小时，酶解反应结束后煮沸10-15分钟，冷却至室温后即可。7.根据权利要求1-6任一项所述的提取方法，其特征在于，还包括在所述酶解反应之后，进行去蛋白的步骤；将经过酶解反应的清液以截留分子量为1×104Da-6×104Da的膜分离，得到截留物溶液，再将所述截留物溶液按1：(4-6)的体积加入氯仿-正丁醇溶液，混合搅拌20-30分钟，充分静止分层除去白色沉淀，数次后直至界面无白色沉淀即得；或，将经过酶解反应的清液以截留分子量为1×104Da-6×104Da的膜分离，得到截留物溶液，向所述截留物溶液加入占所述截留物溶液体积比为3-5％的三氯乙酸；优选地，在所述去蛋白的步骤之后，还包括纯化；所述纯化包括：将已去蛋白的截留物溶解于蒸馏水中，加入处理好的ME-1树脂中，吸附过夜，装柱；分别以水、5％乙醇及15％乙醇依次洗脱，至洗脱液中不含糖，收集15％乙醇洗脱组分，收集冻干，得牡蛎多糖。8.根据权利要求1-7任一项所述的提取方法，其特征在于，将牡蛎肉加水匀浆；调节匀浆液pH值至6-7，加入枯草杆菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶解，升温至80-90℃，保持5-10分钟后，降温至20-25℃；将异淀粉酶加入到清液中，调整清液pH值至6.5-7.0，酶解温度为40-45℃，酶解反应后煮沸，冷却至室温，离心，取清液；用截留分子量为1×104Da-6×104Da的膜分离清液，得到截留物；2CN109554417A权利要求书2/2页在截留物溶液中按1：(4-6)加入氯仿-正丁醇溶液，静止分层除去白色沉淀，重复至无白色沉淀，将经过除蛋白截留物溶液的真空浓缩、冷冻干燥，得截留物粉末；将截留物粉末溶解于蒸馏水中，加入ME-1树脂中，吸附过夜，装柱；