一种从Cohn组分Ⅴ上清中分离纯化人血清白蛋白的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109627322A(43)申请公布日2019.04.16(21)申请号201910012824.3(22)申请日2019.01.07(71)申请人中国科学院过程工程研究所地址100190北京市海淀区中关村北二街1号(72)发明人罗坚苏志国陈颖向杰(74)专利代理机构北京品源专利代理有限公司11332代理人巩克栋(51)Int.Cl.C07K14/765(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图2页(54)发明名称一种从Cohn组分Ⅴ上清中分离纯化人血清白蛋白的方法(57)摘要本发明提供了一种从Cohn组分Ⅴ上清中分离纯化人血清白蛋白的方法，包括以下步骤：将Cohn组分Ⅴ的上清液上样至含有阴离子交换层析介质的层析柱中，使用洗脱液洗脱层析柱，收集洗脱液得到人血清白蛋白；本方法首次提出以低温乙醇沉淀组分V上清为原料分离纯化白蛋白的新思路，不采用超滤工艺脱除乙醇，从而大大降低了缓冲液用量，减少操作时间，避免了蛋白长时间在较高乙醇溶液中的变性失活问题，具有操作简单，成本低廉，过程耗时短，蛋白活性收率高等优点。利用本发明方法可以对组分Ⅴ上清中的白蛋白进一步回收，有效提高血浆利用率，降低成本，对于实际应用具有重要的价值。CN109627322ACN109627322A权利要求书1/2页1.一种从Cohn组分Ⅴ上清中分离纯化人血清白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：将Cohn组分Ⅴ的上清液上样至含有阴离子交换层析介质的层析柱中，使用洗脱液洗脱层析柱，收集洗脱液得到人血清白蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阴离子交换层析介质的孔径为10～90nm；优选地，所述阴离子交换层析介质的间隔臂包含3～12个碳原子；优选地，所述阴离子交换层析介质包括DEAESepharoseFastFlow、QSepharoseFastFlow、CaptoQ、CaptoDEAE、CaptoQXP或FractogelEMDTMAE中的任意一种。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将Cohn组分Ⅴ的上清液上样前，还包括使用平衡液平衡阴离子交换层析介质；优选地，所述平衡液为磷酸盐缓冲液；优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为20～100mM；优选地，所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.0～8.0。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述Cohn组分Ⅴ的上清液pH值与平衡液的pH值相同。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述上样结束后，还包括使用平衡液淋洗层析柱；优选地，所述淋洗使用的平衡液的体积为3～10倍柱体积。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述洗脱液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；优选地，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的浓度为20～100mM；优选地，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的pH值为4.0～6.0。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述收集洗脱液后，使用清洗液清洗层析柱；优选地，所述清洗液为含有氯化钠的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；优选地，所述氯化钠在柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的浓度为0.2～1M；优选地，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的浓度为20～100mM；优选地，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的pH值为4.0～6.0。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述洗脱液进行超滤浓缩并置换缓冲液得到人血清白蛋白。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述超滤浓缩为使用超滤膜将洗脱液进行超滤；优选地，所述超滤膜的截留分子量为10～30kDa。10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：使用体积为3～10倍柱体积、浓度为20～100mM、pH值为6.0～8.0的磷酸盐缓冲液平衡孔径为10～90nm、间隔臂包含3～12个碳原子的阴离子交换层析介质，将Cohn组分Ⅴ的上清液上样至含有阴离子交换层析介质的层析柱中，其中Cohn组分Ⅴ的上清液与磷酸盐缓冲液pH值相同，然后使用浓度为20～100mM、pH值为4.0～6.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液，将洗脱液使用截留分子量为10～30kDa的超滤膜进行超滤浓缩并置换缓冲液，得到人血2CN109627322A权利要求书2/2页清白蛋白；最后使用清洗液清洗层析柱，其中清洗液为含有浓度为0.2～1M的氯化钠的pH值为4.0～6.0、浓度为20～100mM的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。3CN109627322A说明书1/5页一种从Cohn组分Ⅴ上清中分离纯化人血清白蛋白的方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，涉及一种从Cohn组分Ⅴ上清中分离纯化人血清白蛋白的方法。背景技术[00