应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109651464A(43)申请公布日2019.04.19(21)申请号201811585989.1(22)申请日2018.12.24(71)申请人浙江工业大学地址310014浙江省杭州市下城区潮王路18号浙江工业大学科技处(72)发明人童胜强王超越颜继忠(74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公司33201代理人黄美娟朱思兰(51)Int.Cl.C07H17/07(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法(57)摘要本发明提供了一种应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法，本发明通过pH区带精制逆流色谱分离黄芩苷和汉黄芩苷，工艺简单，回收率高，分离得到的黄芩苷和汉黄芩苷纯度高，对黄芩药材的充分利用有重要作用。CN109651464ACN109651464A权利要求书1/1页1.一种应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法，其特征在于，所述方法为：(1)在分液漏斗中加入甲基叔丁醚、正丁醇、四氢呋喃与水体积比为2～6：0～4：1～5：5的混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相加入终浓度为5～20mM的酸性物质作为固定相，下相加入终浓度为5～20mM的碱性物质作为流动相；所述酸性物质为三氟乙酸或醋酸；所述碱性物质为氨水或三乙胺；(2)取黄芩的乙醇粗提物用步骤(1)所述固定相和下相的混合液溶解，制得样品溶液；所述固定相和下相的体积比为1：1；所述固定相和下相的混合液的体积用量以黄芩的乙醇粗提物的质量计为0.05～0.1mL/mg；(3)取步骤(1)制备的固定相注满逆流色谱仪的分离柱，随后注入步骤(2)所得样品溶液，待进样完成后，开启速度控制器，使分离柱正转，在550～850r/min转速下，以1～2mL/min的流速持续注入步骤(1)制备的流动相，以波长250～400nm的紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，薄层层析跟踪检测至洗脱液中无样品组分，停止收集；所述样品溶液的进样体积小于分离柱柱体积的30％；(4)将步骤(3)收集的洗脱液通过薄层层析和高效液相色谱进行检测，分别合并与黄芩苷和汉黄芩苷标准品Rf值及保留时间相同且纯度大于90％的黄芩苷和汉黄芩苷洗脱液，用旋转蒸发仪回收溶剂，得到黄芩苷和汉黄芩苷。2.如权利要求1所述的应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述甲基叔丁醚、正丁醇、四氢呋喃与水体积比为2：2：1：5。3.如权利要求1所述的应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述黄芩的乙醇粗提物按如下方法制得：将黄芩干燥根粉碎，过60目筛，得到黄芩细粉，将所得黄芩细粉与乙醇按料液比1：10混合，超声1h，过滤，收集滤液，完成一次提取过程，滤渣重复提取2次，合并滤液，用1mol/L盐酸水溶液调节pH值为2.0，再于80℃水浴中保温30min至不再析出沉淀，过滤，弃去沉淀，滤液用旋转蒸发仪回收溶剂，得到乙醇粗提物。4.如权利要求1所述的应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述样品溶液的进样体积为分离柱柱体积的5％～10％。5.如权利要求1所述的应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述样品溶液通过进样圈注入或通过泵泵入逆流色谱仪。6.如权利要求1所述的应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述高效液相色谱的检测条件为：AgilentSB-C18，4.6×250mm，5μm；柱温25℃；流动相：体积比75：22乙腈-1％磷酸水溶液，等度洗脱；流速：0.8ml/min；检测波长：274nm；进样量：20μl。7.如权利要求1所述的应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法，其特征在于，步骤(3)或(4)中，所述薄层层析的展开剂为醋酸乙酯、丙酮、甲酸和水体积比26：7：1.5：3的混合溶剂。2CN109651464A说明书1/5页应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法(一)技术领域[0001]本发明涉及一种应用pH区带精制逆流色谱分离黄芩中的黄芩苷和汉黄芩苷的方法。(二)背景技术[0002]黄芩为唇形科植物黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根，是一种名贵的中药材，首载于古代第一部本草著作《神农本草经》，其药用历史悠久，是我国广泛应用的传统中药材之一，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效。黄