一种胰高血糖素样肽的捕获方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110066332A(43)申请公布日2019.07.30(21)申请号201810061504.2(22)申请日2018.01.23(71)申请人齐鲁制药有限公司地址250100山东省济南市高新区新泺大街317号(72)发明人熊继元艾现伟孙丽霞王克波芦双台仉旭(51)Int.Cl.C07K14/605(2006.01)C07K1/16(2006.01)C07K1/18(2006.01)C07K1/20(2006.01)C07K1/22(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种胰高血糖素样肽的捕获方法(57)摘要本发明涉及一种胰高血糖素样肽的捕获方法，本发明属于生物医药蛋白质多肽纯化领域。本发明利用柱层析法能使胰高血糖素样肽迅速从不稳定的水相体系中转移至使之稳定的高浓度有机溶剂体系中，减少胰高血糖素样肽的损失，提高了收率，利于进一步精细纯化，操作简便。CN110066332ACN110066332A权利要求书1/1页1.一种胰高血糖素样肽的捕获方法，其特征在于：从含有胰高血糖素样肽和至少一种相关杂质的混合物中捕获所述胰高血糖素样肽，相关杂质为来源于化学合成或生物发酵的副产物，所述混合物为澄清或带浊光的溶液，所述捕获方法为柱层析法。2.根据权利要求1的方法，其中所述胰高血糖素样肽是GLP-1、GLP-1类似物、GLP-1衍生物或GLP-1类似物的衍生物。3.根据权利要求2的方法，其中所述GLP-1类似物为Arg34-GLP-1(7-37)，其中所述GLP-1的衍生物或GLP-1类似物的衍生物具有赖氨酸残基，其中亲脂取代基可选地经由间隔基连接于所述赖氨酸的-氨基基团，所述亲脂取代基具有8-40个碳原子。4.根据权利要求1的方法，其中所述相关杂质选自：胰高血糖素样肽的氨基酸截短形式或氨基酸延长形式或修饰形式、与胰高血糖素样肽共表达的标签蛋白或融合蛋白形式，其中所述修饰形式是糖基化形式、氧化形式、脱酰胺形式或消旋造成的形式；所述相关杂质也可以是来源于宿主细胞的蛋白质和核酸形式，其中所述宿主细胞是酵母细胞或大肠杆菌细胞。5.根据权利要求1的方法，其中所述胰高血糖素样肽和至少一种相关杂质在混合物中的总肽浓度为0.01mg/ml～5.00mg/ml，优选的，总肽浓度为0.01mg/ml～1.0mg/ml，优选的，总肽浓度为0.1mg/ml～1.0mg/ml。6.根据权利要求1的方法，其中所述混合物的体积为层析柱介质体积的10～1000倍，优选的，所述混合物的体积为层析柱介质体积的10～500倍，优选的，所述混合物的体积为层析柱介质体积的50～200倍。7.根据权利要求1的方法，其中所述混合物的pH范围从pH4至pH10。8.根据权利要求1的方法，其中所述层析柱是单根的，或两根及以上的以串联或并联方式连接的装填有层析介质的层析柱。9.根据权利要求1的方法，其中所述层析柱的介质选自阳离子交换层析树脂、阴离子交换层析树脂、金属鳌合亲和层析层析树脂或反相层析树脂。10.根据权利要求8-9任一项所述的方法，其中洗脱溶剂的pH范围从pH4至pH10；所述洗脱溶剂为含浓度为10％～90％的有机溶剂；优选的，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇或乙腈。2CN110066332A说明书1/5页一种胰高血糖素样肽的捕获方法技术领域[0001]本发明涉及生物医药蛋白质多肽纯化领域。具体的，本发明涉及一种胰高血糖素样肽的捕获方法。背景技术[0002]胰高血糖素样肽是人体下消化道L-细胞分泌的一种肠降血糖素激素，研究表明其可以降低2型糖尿病受试患者的血糖浓度。当血糖浓度超过正常水平时，胰高血糖素样肽可以通过刺激胰岛素分泌从而发挥其降血糖作用，是治疗2型糖尿病的合格药物，当胰高血糖素样肽联合胰岛素用于治疗2型糖尿病时，受试者将会获得更好的疗效，即使经磺酰类药物治疗失败的患者也能发挥疗效，而且无发生严重低血糖症的风险。胰高血糖素样肽能够刺激胰腺β-细胞的生长与增生并能促进导管细胞成为新的胰腺β-细胞。胰高血糖素样肽还可以减低正常体重，消瘦或肥胖受试者的食欲，而且还可以降低2型糖尿病受试者的体重。迄今为止已经开发了胰高血糖素样肽及其类似物、衍生物等一系列的药物。[0003]生理性的胰高血糖素样肽在体内会被二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)迅速灭活，使胰高血糖素样肽的生理半衰期仅为1-2min。利用基因工程技术在大肠或酵母表达体系中表达生产的胰高血糖素样肽同样不稳定，易发生降解，导致相关杂质增多，纯化困难。因此，需要一种基于层析柱的捕获技术，从大体积的含有较低浓度胰高血糖素样肽的体系中迅速捕获胰高血糖素样肽并转移到一种使胰高血糖素样肽能稳定存在的体系中。[0004]现有技术中，CN103