一种人抑制素B的单克隆抗体及其应用和试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110790836A(43)申请公布日2020.02.14(21)申请号201911154445.4(22)申请日2019.11.22(71)申请人郑州安图生物工程股份有限公司地址450000河南省郑州市经济技术开发区经北一路87号(72)发明人汤久停张跃峰孙理智李新远刘功成渠海付光宇(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人刘猛(51)Int.Cl.C07K16/26(2006.01)G01N33/74(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图2页(54)发明名称一种人抑制素B的单克隆抗体及其应用和试剂盒(57)摘要本发明涉及体外诊断技术领域，公开了一种人抑制素B的单克隆抗体及其应用和试剂盒。本发明所述单克隆抗体在人抑制素B单克隆抗体基础上切除Fc段。本发明以去除Fc段的人抑制素B单克隆抗体为酶标抗体，基于双抗体夹心法检测人抑制素B，可达到较高的特异性、灵敏度和回收率，同时可排除临床异样样本；以磁微粒作为载体，结合化学发光法检测，可极大的提高反应速度，在30min内有效检测人INHB。CN110790836ACN110790836A权利要求书1/1页1.一种人抑制素B的单克隆抗体，其特征在于，在人抑制素B单克隆抗体基础上切除Fc段。2.根据权利要求1所述单克隆抗体，其特征在于，人抑制素B单克隆抗体切除Fc段过程如下：将人抑制素B单克隆抗体透析，然后用活化后的木瓜蛋白酶孵育，然后用碘乙酰胺终止反应，再次透析，透析液用离子交换树脂纯化并用NaCl洗脱，收集首峰，获得切去Fc段的单克隆抗体。3.根据权利要求2所述单克隆抗体，其特征在于，人抑制素B单克隆抗体切除Fc段过程如下：将人抑制素B单克隆抗体用磷酸盐缓冲液透析，然后用活化后的木瓜蛋白酶孵育，然后用碘乙酰胺避光冰浴终止反应，用Tris-HCl再次透析，透析液用DEAE离子交换树脂纯化并用NaCl洗脱，收集首峰，获得切去Fc段的单克隆抗体。4.根据权利要求2或3所述单克隆抗体，其特征在于，所述活化后的木瓜蛋白酶为由磷酸缓冲液、EDTA、半胱氨酸活化后的木瓜蛋白酶。5.根据权利要求1-3任意一项所述单克隆抗体，其特征在于，所述人抑制素B单克隆抗体为抗抑制素Bα亚单位的单克隆抗体。6.权利要求1-5任意一项所述单克隆抗体在检测人抑制素B含量或在制备检测人抑制素B的试剂盒中的应用。7.一种检测热抑制素B的试剂盒，其特征在于，包括酶标记的权利要求1-5任意一项所述单克隆抗体以及样本预处理液；所述样本预处理液是包含有0.4％过氧化脲的PBS缓冲液。8.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，还包括如下组分中的一种或两种以上：包被人抑制素B单克隆抗体的载体、抑制素B校准品、洗涤液和酶显色底物。9.一种检测人抑制素B含量的方法，其特征在于，利用权利要求7或8所述试剂盒，采用化学发光法进行检测。2CN110790836A说明书1/10页一种人抑制素B的单克隆抗体及其应用和试剂盒技术领域[0001]本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种人抑制素B的单克隆抗体及其应用和试剂盒。背景技术[0002]抑制素(inhibin,INH)是一个异二聚体的糖蛋白，其中α-亚单位与一个βA-亚单位组成抑制素-A(INHA)，而与βB-亚单位组成抑制素-B(INHB)。它们在血液中也可以无生物活性的游离亚单位形式存在。INHB是由生殖系统细胞分泌产生，与生殖能力有密切关系，对生殖功能具有内分泌、旁分泌和自分泌的调节作用。[0003]INHB是睾丸来源的糖蛋白激素，成年男性体内血清抑制素B水平与FSH呈显著负相关，对FSH起负反馈作用。抑制素B水平反映了整个睾丸组织的功能，是输精管道的直接产物，成年男性血清中维持可检测的抑制素B水平需要生精细胞的存在，因此抑制素B被认为是男性精子发生的血清标志物。男性出生不久，INHB水平逐渐上升，在4-12个月时达到一个峰值(210±31)pg/ml，3-9岁下降至(81±12)pg/ml的低值；在青春期启动后,INHB水平又逐渐升高，在20-30岁时达到另一个峰值(167±20)pg/ml，此后INHB水平随年龄增加而逐渐降低。[0004]血清抑制素B测定可用于评价男性不育病人的生精功能，儿童隐睾、性早熟的诊断，区分梗阻性与非梗阻性无精子症患者，对非阻塞性无精子症病人睾丸精子抽吸的预测，监测放、化疗对男性生精功能的损伤等。抑制素B比促卵泡刺激素(FSH)能更准确的反映睾丸的生精功能及其损伤程度；两者结合比任一单独使用有较高的诊断敏感性与特异性。[0005]目前对抑制素B指标的测定常采用酶联免疫吸附测定法