重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺、重组CA16病毒疫苗及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111171117A(43)申请公布日2020.05.19(21)申请号201911390086.2C07K1/18(2006.01)(22)申请日2019.12.27C07K1/16(2006.01)A61K39/125(2006.01)(71)申请人深圳康泰生物制品股份有限公司A61P31/14(2006.01)地址518000广东省深圳市南山区科技工业园科发路6号(72)发明人李进唐敏刘鹏钟礼军祝孟杰郭靖李国顺(74)专利代理机构深圳市行一知识产权代理事务所(特殊普通合伙)44453代理人杨贤(51)Int.Cl.C07K14/085(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/20(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺、重组CA16病毒疫苗及其制备方法(57)摘要本发明实施例公开了一种重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺、CA16病毒疫苗及其制备方法。所述纯化工艺包括有细胞发酵、破碎、澄清、微滤、超滤和若干层析步骤，所述层析步骤包括：离子交换层析；使用疏水层析介质Phenyl6FF进行疏水层析；分子筛层析。实施本发明，可显著提高抗原回收率和蛋白除杂率。CN111171117ACN111171117A权利要求书1/1页1.一种重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺，包括有细胞发酵、破碎、澄清、微滤、超滤和若干层析步骤，其特征在于，所述层析步骤包括：离子交换层析；使用疏水层析介质Phenyl6FF进行疏水层析；分子筛层析。2.根据权利要求1所述的重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺，其特征在于，所述疏水层析具体包括：pH7.5-8.5的高盐硫酸铵缓冲液平衡疏水层析柱(Phenyl6FF)2-5个柱体积后上样，继续平衡1-3个柱体积，再使用pH7.5-8.5的低盐硫酸铵缓冲液洗脱，收集洗脱液UV280nm紫外吸收峰。3.根据权利要求1或2所述的重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺，其特征在于，所述离子交换层析采用离子交换层析介质NuviaTMHP-Q进行。4.根据权利要求3所述的重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺，其特征在于，所述离子交换层析具体包括：pH7.5-8.5的Tris盐缓冲液平衡离子交换层析柱(NuviaTMHP-Q)2-5个柱体积后上样超滤蛋白液，平衡2个柱体积后，使用pH7.5-8.5的Tris低盐缓冲液洗脱，收集洗脱液UV280nm紫外吸收峰。5.根据权利要求1-4中任一项的所述的重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺，其特征在于，使用SephacarylS300HR进行分子筛层析。6.根据权利要求5所述的重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺，其特征在于，所述分子筛层析具体包括：pH6.0-8.0的PBST缓冲液平衡分子筛层析柱(SephacarylS300HR)，继续平衡1-3个柱体积，收集洗脱液UV280nm紫外吸收峰，得到目的蛋白液。7.根据权利要求5所述的重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺，其特征在于，所述微滤步骤包括：将收集的澄清上清液以0.2-0.65μm膜包采用pH6.8-8.5的缓冲液进行微滤以除去大分子物质，进行2-10倍浓缩，2-5倍洗滤收集透过液得到粗纯蛋白液。8.根据权利要求5所述的重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺，其特征在于，所述超滤步骤包括：将收集的粗纯蛋白液以100kd-500kd膜包采用pH6.8-8.5的缓冲液进行超滤以除去小分子物质，进行2-10倍浓缩，6-7倍洗滤收集超滤液，得到超滤蛋白液。9.一种重组CA16病毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括有1-8中任一项所述的纯化工艺。10.一种重组CA16病毒疫苗，其特征在于，采用如权利要求9所述的制备方法制备得到。2CN111171117A说明书1/5页重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺、重组CA16病毒疫苗及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及重组CA16病毒疫苗制备技术，尤其涉及一种重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺、重组CA16病毒疫苗及其制备方法。背景技术[0002]现有重组CA16病毒样颗粒的纯化工艺为：细胞破碎液→澄清、微滤、超滤→离子交换层析CaptoQ(GE)→羟基磷灰石层析CHT(伯乐)→分子筛层析SephacarylS300HR(GE)。[0003]在这一工艺中，须使用羟基磷灰石层析介质CHT，在重组CA16病毒样颗粒纯化过程中，CHT层析抗原回收率仅为30-45％。[0004]在这一工艺中，须使用强阴离子交换层析介质CaptoQ，在重组CA16病毒样颗粒纯化过程中，进行大量载量测试，使用CA16超滤产物样品上样于CaptoQ离子交换层析柱，其填料载量为1-