多肽的纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111363024A(43)申请公布日2020.07.03(21)申请号201811603241.X(22)申请日2018.12.26(71)申请人深圳翰宇药业股份有限公司地址518057广东省深圳市南山区高新技术工业园中区翰宇生物医药园办公大楼四层(72)发明人尹传龙宓鹏程曾驰陶安进袁建成(74)专利代理机构深圳市深佳知识产权代理事务所(普通合伙)44285代理人王仲凯(51)Int.Cl.C07K14/605(2006.01)C07K1/20(2006.01)C07K1/14(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图5页(54)发明名称多肽的纯化方法(57)摘要本发明涉及多肽纯化领域，特别涉及多肽的纯化方法。本发明提供了一种多肽纯化方法，区别于传统纯化方法，可以弥补传统纯化多次回收成本增加，周期较长，废液排放量大缺点，大大提高收率，并且易于放大生产。通过本发明对比工艺可以出，有机溶剂主要用于脱盐部分，甚至有的项目工艺全程均不采用有机相，所以通过对比数据看出，有机溶剂使用量减少约80％以上。该方法可以提高产品的纯度，纯度大于99％，单杂小于0.15％，特别是降低有机溶剂的使用量，大大降低成本和环保压力。CN111363024ACN111363024A权利要求书1/1页1.多肽的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：取所述多肽粗品经第一双水相系统粗提纯；步骤2：取所述步骤1的产物经第二双水相系统精制；步骤3：取所述步骤2的产物反相、凝胶或离子脱盐，收集最大峰对应的溶液；所述第一双水相系统包括第一聚合物和第一制剂；所述第二双水相系统包括第二聚合物和第二制剂；所述第一聚合物或所述第二聚合物独立选自聚乙二醇、聚丙二醇或葡聚糖；所述第一聚合物或所述第二聚合物可以相同也可以不同；所述第一制剂为硫酸铵、碳酸氢铵、醋酸铵、硫酸铵、磷酸二氢钾、磷酸、氯化钠；所述第二制剂为磷酸盐、冰醋酸、氯化钾、醋酸铵。2.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述聚乙二醇的分子量选自3000、4000、6000或8000。3.如权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，所述第一聚合物的浓度为10mmol/L～50mmol/L；所述第一制剂的浓度为10mmol/L～100mmol/L。4.如权利要求1至3任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述第二聚合物的浓度为5mmol/L～100mmol/L，所述第二制剂的浓度为20mmol/L～100mmol/L。5.如权利要求1至4任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述第一双水相系统的pH值为2.3～9.5；所述第二双水相系统的pH值为2.0～4.0。6.如权利要求1至5任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钠或磷酸氢二钾。7.如权利要求1至6任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述反相脱盐的固定相为C4、C8、C18，粒径为10μm。8.如权利要求1至7任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述反相脱盐的溶液为95％醋酸铵溶液和5％乙腈溶液，所述反相脱盐的时间为15～30min。9.如权利要求1至8任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述反相脱盐采用梯度洗脱，洗脱液中A相为水，B相为乙腈，B相洗脱梯度为10％～45％(60min)。10.如权利要求1至9任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述多肽选自利拉鲁肽、萨摩鲁肽、卡贝缩宫素、特利加压素、特立帕肽、去氨加压素、西曲瑞克、胸腺法新、爱啡肽或艾塞那肽。2CN111363024A说明书1/11页多肽的纯化方法技术领域[0001]本发明涉及多肽纯化领域，特别涉及多肽的纯化方法。背景技术[0002]利拉鲁肽，英文名liraglutide，其肽序为：[0003]H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH。[0004]利拉鲁肽(liraglutide)由丹麦制药企业诺和诺德公司研制，是生物合成的人肠促胰素GLP-1(胰高血糖素样肽1)类似物。利拉鲁肽是GLP-1受体激动剂，在分子结构、生物活性、作用靶点及免疫原性等方面与人GLP-1相似。GLP-1主要是膜岛细胞和肠道(主要是远端小肠和结肠)的L细胞分泌的膜高血糖素的衍生物，由30个氨基酸组成的多肽。GLP-1(7-36)是由前胰高血糖素原经过加工修饰的含30个氨基酸的多肽。利拉鲁肽系在GLP-1的第34位将赖氨酸替换为精氨酸，并在第26位增