一种检测赛庚啶的时间分辨荧光免疫试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111366719A(43)申请公布日2020.07.03(21)申请号201811591675.2(22)申请日2018.12.25(71)申请人镇江亿特生物科技发展有限公司地址212009江苏省镇江市新区丁卯经十二路668号(72)发明人杜霞袁超丁炎(51)Int.Cl.G01N33/533(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种检测赛庚啶的时间分辨荧光免疫试剂盒(57)摘要本发明公开了一种检测赛庚啶的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒。所述检测赛庚啶的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、赛庚啶标准品、赛庚啶的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测赛庚啶的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。CN111366719ACN111366719A权利要求书1/1页1.一种检测赛庚啶的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：由多孔包被板，缓冲液，赛庚啶标准品，赛庚啶的抗体冻干品，铕标记的羊抗鼠抗体，洗涤液和增强液所组成。2.一种根据权利要求1所述检测赛庚啶的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理，其特征在于：(1)将赛庚啶与牛血清白蛋白偶联，得到免疫原；(2)将赛庚啶与卵血清蛋白偶联，得到包被原；(3)用步骤(1)的免疫原免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗赛庚啶的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；(4)以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用ProteinG柱进行纯化，获得抗赛庚啶的单克隆抗体(5)用步骤(2)的包被原包被固相载体；(6)将动物组织先经过酸解提取后，再过MAX柱净化，最后加入衍生试剂和催化剂进行处理，得到待测产物；(7)将步骤(6)的待检物进行测量荧光强度cps，对照标准曲线计算样品中的赛庚啶赛庚啶含量。3.根据权利要求1所述检测赛庚啶的时间荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的固相载体是多孔包被板，采用96孔的多微孔包被板作为固相载体。4.根据权利要求1所述检测赛庚啶的时间荧光分辨免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的衍生试剂是丁胺。5.根据权利要求1所述检测赛庚啶的时间分辨荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的催化剂是腈基磷酸二乙酯。6.根据权利要求1所述检测赛庚啶的时间荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述步骤(6)和(7)具体为取包被有赛庚啶-OVA的微孔包被板，加入50µL处理好的样品到各自的微孔中，加入50µL以缓冲液稀释的赛庚啶抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗三次，加3+以缓冲液稀释的100µLEu-羊抗鼠抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗六次，加200µL增强液振荡5分钟后测量荧光强度cps，从标准曲线计算样品中的赛庚啶含量。2CN111366719A说明书1/5页一种检测赛庚啶的时间分辨荧光免疫试剂盒技术领域[0001]本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测赛庚啶的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。背景技术[0002]赛庚啶(Cyproheptadine，CYP)是一种人用药，在临床上用于治疗过敏反应导致的皮炎等疾病，由于该药具有可抑制下丘脑的饱觉中枢而刺激食欲的作用，可以促进动物生长。2010年，上海市兽药饲料检测所首次发现CYP被一些不法畜牧养殖企业作为新型养殖促进剂非法使用，而CYP在畜产品中的残留对消费者的健康极有危害。2010年底，中国农业部第1519号公告《禁止在饲料和动物饮水中使用的物质》明确禁止使用该类药物作为家畜的生产促进剂，2012年，上海市和江苏省率先开展了地产生猪出栏前CYP监测。[0003]动物口服CYP后40%以上由尿液排泄，主要为原形药物及葡萄糖醛酸结合的季铵盐型CYP，不同动物的尿液中代谢物成分含量有所不同。可通过检测猪尿中的CYP残留以监控其在养殖业的非法使用。[0004]在赛庚啶的检测方法方面，目前最为常用的方法包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)、液相色谱-质谱联用(LC-MS)、酶联免疫吸附分析法(ELISA)等方法。高效液相色谱法(HPLC)具有检测精确度高、假阳性率低的特点；高效液相色谱法(HPLC)的主要确定是仪器价格昂贵、操作比较繁琐，耗时长，检测成本高。气相色谱-质谱联用(GC-