一种海参中生物活性物质的提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111393537A(43)申请公布日2020.07.10(21)申请号202010271621.9C12P21/06(2006.01)(22)申请日2020.04.08C07K1/34(2006.01)(71)申请人潍坊悦龙堂海洋科技有限公司地址261000山东省潍坊市寒亭区开元街道中国食品谷总部基地F座808房间申请人青岛海洋生物医药研究院(72)发明人于德君王长伟王铭洪王松颜景泉(74)专利代理机构青岛合创知识产权代理事务所(普通合伙)37264代理人王晓晓(51)Int.Cl.C08B37/00(2006.01)C07J71/00(2006.01)C11B1/10(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图2页(54)发明名称一种海参中生物活性物质的提取方法(57)摘要本发明提供了一种海参中生物活性物质的提取方法，包含原材料预处理、溶剂提取、亲脂溶剂除脂、油脂回收、正丁醇萃取、树脂富集纯化、除醇酶解、灭酶、离心除杂、粗多糖沉淀、离心分离、超滤纯化、活性炭吸附脱色、纳滤除盐工艺过程。本发明通过一套完整的工艺从海参中提取分离了海参多糖、海参皂苷、海参脂质及海参多肽，解决了现有技术中无法同时分离提取四种成分的问题。与现有工艺相比，本发明不仅降低了海参原料的损耗，而且提高了收率和提取物纯度，本发明提供的方法严谨科学，操作性较强，易于实现工业化，为后续海参高效综合利用提供了新的制备方法。CN111393537ACN111393537A权利要求书1/2页1.一种海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）、原料预处理：取新鲜海参清洗去除内脏，剪碎后打成碎渣，研磨成海参浆；（2）、溶剂提取：向海参浆中加入乙醇水溶液，加热回流，得到乙醇提取液和固体；（3）、亲脂溶剂除脂：将乙醇提取液浓缩至干，加水溶解，用亲脂溶剂萃取，得到脱脂水溶液层与亲脂溶剂层；（4）、脂质回收：将亲脂溶剂层减压蒸干，得到海参脂质；（5）、正丁醇萃取：用氨水调节脱脂水溶液层pH，加入饱和正丁醇，充分振荡，静止分层，收集上层正丁醇层，得到正丁醇萃取液，浓缩至干，得粗皂苷粉末；（6）、树脂富集纯化：将粗皂苷粉末溶于水，用树脂吸附，乙醇水溶液洗脱，将洗脱液浓缩至干，得海参皂苷；（7）、除醇酶解：将步骤（2）所得固体，用水冲洗至无乙醇味，加入缓冲液，然后依次加入木瓜蛋白酶、乙二胺四乙酸和半胱氨酸盐酸盐，混合均匀，酶解，得到酶解液；（8）、灭酶：将酶解液进行灭酶，冷却至室温，得到冷却灭酶料液；（9）、离心除杂：将冷却灭酶料液离心，弃去滤渣，收集上清液；（10）、粗多糖沉淀：向步骤（9）的上清液中加入多糖沉淀剂，静止，得到静止分层物料；（11）、离心分离：将静止分层物料离心分离，上清液为海参粗多肽溶液，下层沉淀物为海参粗多糖；（12）、超滤纯化：加水复溶海参粗多糖，进行超滤，得到透过液和浓缩液；（13）、活性炭吸附脱色：将浓缩液加入活性炭，得脱色液，过滤，洗涤滤渣，得洗涤液，合并脱色液与洗涤液，干燥得到海参多糖；（14）、纳滤除盐：将步骤（11）所得上清液与步骤（12）所得透过液合并，进行纳滤，收集浓缩液干燥得到海参多肽。2.根据权利要求1所述的海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述步骤（2）中海参浆和乙醇水溶液的料液比为1:2~5g/mL，乙醇水溶液的体积分数为50%-90%。3.根据权利要求1所述的海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述步骤（3）中亲脂溶剂为石油醚、乙酸乙酯、苯或乙醚。4.根据权利要求1所述的海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述步骤（5）中氨水调节pH值为7.5~8.5。5.根据权利要求1所述的海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述步骤（6）中的树脂为弱极性大孔树脂，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为50%-90%。6.根据权利要求1所述的海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述步骤（7）中缓冲液为乙酸钠-乙酸缓冲液，固体与乙酸钠-乙酸缓冲液的料液比为1:10~50g/mL。7.根据权利要求1所述的海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述步骤（7）中木瓜蛋白酶加入量为海参中粗蛋白含量的1.0%-3.0%，加入乙二胺四乙酸、半胱氨酸盐酸盐浓度均为5~7mmol/L。8.根据权利要求1所述的海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述步骤（10）中所述多糖沉淀剂为低级醇溶液、酮水溶液或盐溶液。9.根据权利要求1所述的海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述步骤（13）中活性炭添加量为浓缩液固形物含量的1%-3%，脱色温度为70-80℃，脱色时间为30-60min。2CN111393537A权利要求书2/2页10