一种四季抗病毒合剂成分含量测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111830170A(43)申请公布日2020.10.27(21)申请号202010723968.2(22)申请日2020.07.24(71)申请人陕西康城药业股份有限公司地址726000陕西省商洛市商州区大荆镇孟村四组(72)发明人肖会敏王建娥汪振华彭真王四旺(74)专利代理机构重庆百润洪知识产权代理有限公司50219代理人杨光(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图7页(54)发明名称一种四季抗病毒合剂成分含量测定方法(57)摘要本发明提供一种四季抗病毒合剂成分含量测定方法。所述四季抗病毒合剂成分含量测定方法包括以下步骤：第一步：色谱准备；第二步：对照品溶液制备；第三步：供试品溶液制备；第四步：分别制备缺连翘药材的制剂、缺甘草药材的制剂、缺紫苏叶药材的制剂、缺菊花和鱼腥草药材的制剂、缺菊花，鱼腥草，薄荷药材的制剂、缺紫苏叶、荆芥和芦根的制剂；第五步：方法学考察。本发明提供的四季抗病毒合剂成分含量测定方法，利用超快速液相色谱法对四季抗病毒合剂中17种成分进行含量测定，所用色谱条件具有良好的精密度、重复性，方法加样回收率良好，所用四季抗病毒合剂具有良好的稳定性，为四季抗病毒合剂建立了多成分定量方法。CN111830170ACN111830170A权利要求书1/2页1.一种四季抗病毒合剂成分含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：色谱准备：KromasilC18柱；以乙腈－0.085％磷酸水溶液为流动相，按以下梯度进行洗脱：0～30min，B98％→70％；30～45min，B70％→55％；45～60min，B55％→39％，检测波长记：277nm，254nm；记录时间为60min；流速：0.8ml·min－1；柱温：30℃；进样量：5μl；第二步：对照品溶液制备：分别精密称取新绿原酸6.9mg、绿原酸4.8mg、咖啡酸10.0mg、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸11.0mg、连翘酯苷B16.6mg、连翘酯苷A18.0mg、异槲皮苷22.0mg、甘草苷6.4mg、阿魏酸6.9mg、橙皮苷0.8mg、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸9.8mg、迷迭香酸4.4mg、连翘苷6.1mg、蒙花苷4.1mg、槲皮素11.2mg、甘草酸6.5mg于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即为对照品溶液，浓度分别为0.68mg·ml-1、0.48mg·ml-1、1.00mg·ml-1、1.04mg·ml-1、1.60mg·ml-1、1.68mg·ml-1、2.04mg·ml-1、0.6mg·ml-1、0.68mg·ml-1、0.08mg·ml-1、0.96mg·ml-1、0.40mg·ml-1、0.58mg·ml-1、0.40mg·ml-1、1.12mg·ml-1、0.60mg·ml-1，精密吸取紫苏醛10.6μl于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即为紫苏醛对照品溶液，浓度为1.00μl·ml-1；第三步：供试品溶液制备：取四季抗病毒合剂，精密量取1.0ml，置于5ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；第四步：分别制备缺连翘药材的制剂、缺甘草药材的制剂、缺紫苏叶药材的制剂、缺菊花和鱼腥草药材的制剂、缺菊花，鱼腥草，薄荷药材的制剂、缺紫苏叶、荆芥和芦根的制剂，再根据第三步分别制备缺连翘阴性对照溶液、缺甘草阴性对照溶液、缺紫苏叶阴性对照溶液、缺菊花和鱼腥草阴性对照溶液、缺菊花、鱼腥草和薄荷的阴性对照溶液、缺紫苏叶、荆芥和芦根阴性对照溶液；第五步：方法学考察，所述方法学考察包括线性关系考察、专属性试验、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验和含量测定，所述线性关系考察为吸取第二步中的对照品溶液各250μl于5ml量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，做为储备液，分别精密量取储备液0.05ml，0.2ml，0.25ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml和1ml置于各1ml量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，分别记为混合对照溶液1、2、3、4、5、6、7；精密量取储备液1ml用氮气吹干，加入0.1ml甲醇溶解，记为混合对照溶液8，用0.45μm微孔滤膜滤过，进样，以各对照品的浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。2.根据权利要求1所述的一种四季抗病毒合剂成分含量测定方法，其特征在于：所述专属性试验为分别精密量取混合对照溶液6、供试品溶液、阴性对照溶液各5μl进样，记录色谱图。3.根据权利要求1所述的一种四季抗病毒合剂成分含量测定方法，其特征在于：所述精密度试验为取混合对照溶液6，分别在所述第一步中的色谱条