一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112645993A(43)申请公布日2021.04.13(21)申请号202011554317.1(22)申请日2020.12.24(71)申请人西安蓝晓科技新材料股份有限公司地址710075陕西省西安市高新区锦业路135号申请人高陵蓝晓科技新材料有限公司(72)发明人李佩陶吴丹张赪刘琼寇晓康(74)专利代理机构北京三聚阳光知识产权代理有限公司11250代理人李红团(51)Int.Cl.C07H15/16(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图1页(54)发明名称一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法(57)摘要本发明公开了一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，首先采用反相层析的方法对林可霉素粗品进行纯化，再经过脱盐、转盐，干燥后得到高纯度盐酸林可霉素。此方法能快速有效去除杂质，符合法规、市场对盐酸林可霉素原料药的要求。本发明方法操作简单、成本低，获得产品纯度高、收率高、杂质去除完全，适于工业化推广应用。CN112645993ACN112645993A权利要求书1/2页1.一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、采用反相层析的方法，对林可霉素粗品进行纯化得到林可霉素纯化液；步骤二、采用大孔树脂脱盐得到林可霉素脱盐溶液；步骤三、经过转盐、浓缩、干燥得到盐酸林可霉素。2.根据权利要求1所述的高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，其特征在于，步骤一中的反相层析方法包括以下步骤：(1)装柱：用聚合物反相填料作为色谱柱的固定相，加1‑3CV0‑100％V/V含量的有机溶剂‑水溶液匀浆，湿法装柱，柱高不低于25cm，装柱压力0‑10Mpa；(2)柱平衡：使用2‑6CV缓冲盐水溶液平衡色谱柱，过程线流速不高于10cm/min；(3)上样：将林可霉素粗品溶解于缓冲盐水溶液，得到原液浓度200‑300g/L，上样至色谱柱，载量20‑100g/L，过程线流速不高于10cm/min；(4)洗杂：使用5‑10CV含量为5‑15％(V/V)的有机溶剂‑缓冲盐水溶液对色谱柱进行洗杂，洗杂过程线流速不高于10cm/min；(5)洗脱：使用6‑14CV含量为15‑40％(V/V)的有机溶剂‑缓冲盐水溶液对吸附在色谱柱上林可霉素进行洗脱，洗脱过程线流速不高于10cm/min，收集洗脱液组分为林可霉素纯化液；(6)再生：使用6‑10CV含量为80‑100％(V/V)有机溶剂‑水溶液对色谱柱进行再生，再生过程线流速不高于10cm/min；再生结束后进入下一周期纯化过程的平衡步骤。3.根据权利要求1所述的一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，其特征在于，步骤二中的大孔树脂脱盐方法包括以下步骤：(A)浓缩：将反相层析步骤一收集的林可霉素纯化液进行浓缩，降低有机溶剂含量至1‑10％(V/V)，加碱调整至pH10‑12；(B)上样：将浓缩液上样至大孔树脂柱，载量20‑150g/L，线流速不高于5cm/min；(C)冲洗：分别使用2‑6BVpH10‑12的碱溶液、纯水冲洗大孔树脂柱，线流速不高于5cm/min；(D)洗脱：用2‑6BV含量为50‑100％(V/V)有机溶剂‑水溶液对林可霉素进行洗脱，线流速不高于5cm/min，收集洗脱液即为林可霉素脱盐溶液；(E)柱平衡：使用2‑6BV纯水对大孔树脂柱进行再平衡，线流速不高于5cm/min，待进入下一周期脱盐。4.根据权利要求1所述的一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，其特征在于，步骤三中转盐过程是将步骤二中的林可霉素脱盐溶液加入浓度为0.1‑4mol/L的盐酸溶液，调整至pH3.5‑4.5，其中反应温度不超过20℃；浓缩过程是指使用纳滤、蒸馏或减压蒸馏方式将收集液浓缩1‑20倍；干燥过程是指真空干燥后得到粉末状的盐酸林可霉素。5.根据权利要求2所述的一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，其特征在于，所述的反相层析填料是苯乙烯‑二乙烯苯共聚而成的聚合物微球，交联度为80‑99％(W/W)，聚合物微球平均粒径为30‑150μm，孔径为比表面积为800‑1500m2/g。6.根据权利要求2所述的一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，其特征在于，林可霉素粗品是指林可霉素发酵液经过离心、萃取、沉淀、结晶过程后含量为90‑97％(W/W)的林可霉素。2CN112645993A权利要求书2/2页7.根据权利要求2所述的一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，其特征在于，所述的缓冲盐水溶液是指，pH5‑9，浓度为0.5‑5.0％(W/W)的磷酸盐缓冲溶液。8.根据权利要求2所述的一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，其特征在于，所述的有机溶剂是指和水能够任意比例互溶的溶剂，包括但不限于甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇、丙酮中的一种或者几种的混