一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113009005A(43)申请公布日2021.06.22(21)申请号202011472255.X(22)申请日2020.12.18(71)申请人珠海润都制药股份有限公司地址519090广东省珠海市金湾区三灶镇机场北路6号(72)发明人李达胜蔡强汤伟彬刘宁訚敏祁红林(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/34(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法(57)摘要本发明提供了一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法，选择十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，甲酸水溶液和甲醇作为流动相，使得含有NDMA和NDEA及其它杂质的盐酸去甲乌药碱在通过液相色谱分离时，在该条件下NDMA和NDEA分子解离过程中盐酸去甲乌药碱及其它杂质不会对色谱柱对目标物NDMA和NDEA的解离选择性造成干扰，本发明的方法中NDMA峰的理论塔板数不小于6014，NDEA峰的理论塔板数不小于120325，对称因子均不大于2.0，本发明的检测方法的回收率为在85%~102%之间。该方法系统适用性、专属性、精密度、定量限和检测限以及线性和范围均符合要求，分离效果好，操作检测，方法灵敏度高。CN113009005ACN113009005A权利要求书1/1页1.一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）配制盐酸去甲乌药碱的测试溶液；（2）采用液相色谱‑质谱对步骤（1）中溶液进行检测分析，色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲酸水溶液作为流动相A，甲醇作为流动相B，梯度洗脱；质谱条件为：APCI院，正离子模式，MRM方法；其中当所述亚硝胺类化合物为NDMA时，MRM参数：保留时间为2.44min，定量离子的母离子/子离子对为75.1/57.8，驻留时间为100±10ms，碎裂电压35±4V，碰撞能量12±2，CAV2V；当所述亚硝胺类化合物为NDEA时，MRM参数：保留时间为7.05min，定量离子的母离子/子离子对为103.1/75，驻留时间为100±10ms，碎裂电压76±8V，碰撞能量9±1，CAV3V。2.根据权利要求1所述的一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于，所述液相色谱中梯度洗脱程序为：0～3min，95%A，5%B；3～8min，95%→40%A，5%→60%B；8～9min，40%→5%A，60%→95%B；9～12min，5%A，95%B。3.根据权利要求1所述的一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于，所述色谱条件中流动相A中甲酸：水的体积比为0.1~10:1000，优选为甲酸：水的体积比为1:1000。4.根据权利要求13任一项所述的一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方~法，其特征在于，所述色谱条件中进样量为20±2μl，柱温为常温，流速0.5ml/min。5.根据权利要求4所述的一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于，所述质谱中离子源参数如下所示：。6.根据权利要求5所述的一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于，在质谱中，开关阀的切换时间设置为：0~1.5min流动相流入废液，1.5~4.0min流动相流入质谱检测NDMA和NDMA‑d6，4.0~8.5min流动相流入质谱检测NDEA和NDEA‑d10，8.5min之后流动相流入废液。7.根据权利要求6所述的一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于，测试溶液中盐酸去甲乌药碱的浓度为0.02~0.06g/ml，所述测试溶液采用盐酸去甲乌药碱和甲醇水溶液配制。8.根据权利要求7所述的一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于，将所述测试溶液注入气质联用仪中进行检测，记录测试溶液的谱图，采用如下方法计算亚硝胺类化合物的浓度：亚硝胺类mg/kg=；X：由标准曲线求得测试溶液中亚硝胺类浓度ng/ml；DF：稀释因子；W：供试品的取样量g。2CN113009005A说明书1/5页一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法技术领域[0001]本发明涉及化学检测分析技术领域，具体涉及一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法。背景技术[0002]盐酸去甲乌药碱的化学名称是1‑（4‑羟基苄基）‑6,7‑二羟基‑1,2,3,4‑四氢异喹啉盐酸盐。盐酸去甲乌药碱具有心脏β‑肾上腺素受体激动作用，其作用于α‑肾上腺素受体可以舒张血管和抗血小板凝聚活性，还可以在巨噬细胞、血管平滑肌等细胞中抑制诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）的表达和一氧化氮（NO