一种基于PCR检测汞离子的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113088564A(43)申请公布日2021.07.09(21)申请号202110474425.6(22)申请日2021.04.29(71)申请人长江大学地址434023湖北省荆州市南环路1号(72)发明人杨华林周玉张兴平彭宇徐明明(74)专利代理机构武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)42231代理人柏琳容(51)Int.Cl.C12Q1/682(2018.01)C12Q1/6823(2018.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称一种基于PCR检测汞离子的方法(57)摘要本发明公开一种基于PCR检测汞离子的方法，属于汞离子检测技术领域。该方法，包括：S1、将含有多种不同已知浓度的汞离子溶液分别添加至缓冲液得到多种混合物；S2、加入外切核酸酶III继续反应；S3、向多个混合物中加入模板，dNTP，Taq聚合酶并进行PCR反应；S4、向PCR反应后的多种混合物中分别加入SGI；S5、检测加入SGI后的多种混合物的荧光信号，根据荧光信号与汞离子的已知浓度得到两者的线性关系式；S6、将待测液与缓冲液混合进行混合反应，之后检测待测液在529nm的荧光信号，结合步骤S5的线性关系式得到待测液中汞离子的浓度。该方法灵敏度高、对汞离子的选择性好且回收率高。CN113088564ACN113088564A权利要求书1/1页1.一种基于PCR检测汞离子的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将多种不同已知浓度的汞离子溶液分别添加至含有T7pro、T7terpro和Helper的缓冲液进行混合反应得到多种混合物；所述T7pro的序列为：TAATACGACTCACTATAGGGATTCTTTCTT；所述T7terpro的序列为：TGCTAGTTATTGCTCAGCGGATTCTTTCTT；所述Helper的序列为TTGTTTGTTTGGGG；S2、分别向多种所述混合物中加入外切核酸酶III继续反应；S3、向加入外切核酸酶III后的多种混合物中分别继续加入模板，dNTP和Taq聚合酶并进行PCR反应；S4、向进行PCR反应后的多种混合物中分别加入SGI；S5、检测加入SGI后的多种混合物的荧光信号，根据所述荧光信号与所述汞离子的已知浓度得到两者的线性关系式；S6、将待测液与所述含有T7pro、T7terpro和Helper的缓冲液混合进行混合反应，之后执行步骤S2‑S4，之后检测所述待测液的荧光信号，结合步骤S5的线性关系式得到所述待测液中汞离子的浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，进行所述混合反应的温度为35‑37℃，进行所述混合反应的时间为40‑60min。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，反应的温度为35‑37℃。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，反应的时间为20‑30min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，加入所述SGI后进行反应的温度为35‑37℃。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，加入所述SGI后进行反应的时间为30‑40min。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述缓冲液为Tris‑HCl缓冲液。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述模板为pET28a质粒。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S5中，所述线性关系式为Y＝5473580+703818.26373X，其中Y为荧光信号，X为汞离子浓度。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S5中，检测加入SGI后的多种所述混合物在529nm处的荧光信号。2CN113088564A说明书1/5页一种基于PCR检测汞离子的方法技术领域[0001]本发明涉及汞离子检测技术领域，具体涉及一种基于PCR检测汞离子的方法。背景技术[0002]汞是一种环境污染物，在环境中它能以单质，无机和有机形式存在。由于汞离子(Hg2+)分布范围广，化学性质稳定且水溶性好，所以Hg2+是无机形式中不可忽略的一种形式。Hg2+能够与蛋白质的巯基形成强亲和力的Hg‑S键，从而导致呼吸道，胃肠道和神经系统方面的疾病。汞离子还具有生物积累效应，可以通过食物链进入人体。因此，即使在低浓度下，它也可能对人类健康造成严重的损害。世界卫生组织规定饮用水中Hg2+的最高含量为30nM。因此，建立一种高灵敏度的Hg2+检测方法十分迫切。到目前为止，已经开发了许多技术和方法来检测Hg2+，这些方法大致分为仪器方法(例如电感耦合等离子体质谱和原子吸收光谱法)，化学小分子探针，蛋白质生物传感器和DNA生物传感器。其中，DNA生物传感器因其具有高稳定性，可以商业化