一种检测伏马毒素的荧光免疫试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113125735A(43)申请公布日2021.07.16(21)申请号201911392549.9(22)申请日2019.12.30(71)申请人江苏维赛科技生物发展有限公司地址212009江苏省镇江市丁卯新区国家科技园B11栋3楼(72)发明人洪霞杜霞袁超(51)Int.Cl.G01N33/58(2006.01)G01N33/577(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种检测伏马毒素的荧光免疫试剂盒(57)摘要本发明公开了一种检测伏马毒素的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒。所述检测伏马毒素的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、伏马毒素标准品、伏马毒素的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测伏马毒素的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。CN113125735ACN113125735A权利要求书1/1页1.一种检测伏马毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：由多孔包被板，缓冲液，伏马毒素标准品，伏马毒素的抗体冻干品，铕标记的羊抗鼠抗体，洗涤液和增强液所组成。2.一种根据权利要求1所述检测伏马毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理，其特征在于：(1)将伏马毒素与牛血清白蛋白偶联，得到免疫原；(2)将伏马毒素与卵血清蛋白偶联，得到包被原；(3)用步骤(1)的免疫原免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗伏马毒素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；(4)以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用ProteinG柱进行纯化，获得抗伏马毒素的单克隆抗体(5)用步骤(2)的包被原包被固相载体；(6)将动物组织先经过酸解提取后，再过MAX柱净化，最后加入衍生试剂和催化剂进行处理，得到待测产物；(7)将步骤(6)的待检物进行测量荧光强度cps，对照标准曲线计算样品中的伏马毒素伏马毒素含量。3.根据权利要求1所述检测伏马毒素的时间荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的固相载体是多孔包被板，采用96孔的多微孔包被板作为固相载体。4.根据权利要求1所述检测伏马毒素的时间荧光分辨免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的衍生试剂是丁胺。5.根据权利要求1所述检测伏马毒素的时间分辨荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的催化剂是腈基磷酸二乙酯。6.根据权利要求1所述检测伏马毒素的时间荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述步骤(6)和(7)具体为取包被有伏马毒素-OVA的微孔包被板，加入50µL处理好的样品到各自的微孔中，加入50µL以缓冲液稀释的伏马毒素抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗3+三次，加以缓冲液稀释的100µLEu-羊抗鼠抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗六次，加200µL增强液振荡5分钟后测量荧光强度cps，从标准曲线计算样品中的伏马毒素含量。2CN113125735A说明书1/5页一种检测伏马毒素的荧光免疫试剂盒技术领域[0001]本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测伏马毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。背景技术[0002]伏马菌素（FB）是一种霉菌毒素，是由串珠镰刀菌产生的水溶性代谢产物，是一类由不同的多氢醇和丙三羧酸组成的结构类似的双酯化合物。主要污染粮食及其制品，可产生急性毒性反应及潜在的致癌性。相关实验表明，对小鼠进行了伏马毒素的毒理试验，以50mg/kg体重水平饲养小鼠，18~26个月后，发现肝肿瘤患病率急剧上升，证明伏马毒素可引发肝癌。[0003]而时间分辨荧光免疫分析法（TR-FIA）由于其特异性强、灵敏度高、操作简单、廉价，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。目前还没有针对伏马毒素检测的时间荧光免疫分析法的专利和文献报道。发明内容[0004]为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种蔬菜水果中伏马毒素残留的检测时间分辨荧光免疫分析试剂盒。[0005]本发明的目的之二在于提供一种快速简便地检测蔬菜水果中伏马毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，用于定量或定性地检测农作物中伏马毒素残留量。[0006]本发明目的之一是这样实现的：检测伏马毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其关键在于由多孔包被板、缓冲液、伏马毒素标准品溶液、抗伏马毒素的抗体冻干品、铕标记的兔抗鼠抗体、洗涤液和增强液