一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113151397A(43)申请公布日2021.07.23(21)申请号202110150478.2(22)申请日2021.02.03(71)申请人广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院地址510535广东省广州市黄埔区开源大道136号D栋201室(72)发明人袁巧梅肖彩霞(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人段卉(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)权利要求书1页说明书10页附图2页(54)发明名称一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒(57)摘要本发明公开了一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒，所用磁珠为硅羟基磁珠，由多种不同粒径的磁珠混合组成，粒径大小为10～1000nm。捕获核酸的能力强，更适用于微量病毒核酸提取。该试剂盒原料易得、成本低廉；常温贮存，便于运输及使用；提取步骤简便，裂解结合只需加样本、裂解液、磁珠即可进行，无需加入蛋白酶K、CarrierRNA等进口原材料。病毒DNA&RNA共提，回收率高；无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂，对操作人员安全无毒副作用；操作简便，无需离心，对仪器设备要求不高；可匹配高通量自动提取仪；适用于从环境样本，如污水、冰柜、海鲜肉类、食品内外包装等微量病毒样本中提取病毒核酸。CN113151397ACN113151397A权利要求书1/1页1.一种硅羟基磁珠组合物，其特征在于，以质量计，含有20～60％直径为50～200nm的硅羟基磁珠，20～40％直径为300～500nm的硅羟基磁珠，10～40％直径为500～900nm的硅羟基磁珠。2.根据权利要求1所述的硅羟基磁珠组合物，其特征在于，以质量计，含50％直径为50～200nm的硅羟基磁珠，40％直径为300～500nm的硅羟基磁珠，10％直径为500～900nm的硅羟基磁珠。3.权利要求1或2所述的硅羟基磁珠组合物在制备核酸提取和/或纯化试剂盒中的应用。4.一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒，其特征在于，含有磁珠、裂解液、洗涤液I、洗涤液II和洗脱液；其中所述磁珠为权利要求1所述的硅羟基磁珠组合物。5.根据权利要求4所述的核酸提取试剂盒，其特征在于：所述磁珠浓度为10～85mg/ml。6.根据权利要求4所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液含有：2～8mol/L异硫氰酸胍、0.1～3mol/L碘化钠、0.01～0.2mol/LTris‑HCl、1～20％(v/v)非离子表面活性剂、0.1～10mol/L尿素、0.01～10mg/ml糖原、0.01～0.2mol/L金属离子络合剂；裂解液pH为4～7。7.根据权利要求4所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液I含有：1～10％(v/v)吐温20、0.01～1mol/L氯化钠、0.01～0.3mol/LTris‑HCl、0.2～5mol/L盐酸胍、20～60％(v/v)异丙醇。8.根据权利要求4所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液II为60～80％(v/v)乙醇。9.根据权利要求4所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液为无核酸酶水或6～10mol/L的Tris‑HCl‑无核酸酶水。10.一种病毒核酸提取的方法，其特征在于，使用权利要求3所述的核酸提取试剂盒，和/或权利要求1或2所述的硅羟基磁珠组合物。2CN113151397A说明书1/10页一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒技术领域[0001]本发明涉及核酸提取技术领域，具体地，涉及一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒。背景技术[0002]核酸是遗传信息的载体，是基因表达的物质基础。核酸包括DNA和RNA两种，广泛存在于所有的动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合的状态存在。核酸分子的结构改变，必将导致生物功能的改变，如病毒的致病作用，通过病毒核酸侵入机体细胞所至，除此之外，恶性肿瘤、遗传病变、代谢病等都与核酸的分子结构和功能的改变密切相关，故无论是进行核酸结构还是功能研究，首先需要对核酸进行分离和纯化。[0003]常见的核酸提取纯化方法包括苯酚氯仿抽提法、碱裂解法、煮沸法、离心柱法、磁珠法。苯酚氯仿抽提法因其使用了苯酚、氯仿等有毒有机溶剂，且对核酸的回收率低，操作复杂等因素，渐渐退出市场，此外因各实验室条件不同及针对的提取纯化样本不同。煮沸法和离心柱法等提取方法在临床上也有一定的应用，但煮沸法，因其需要进行加热，增加了气溶胶污染的风险，离心柱法因其需要配备高速离心机、成本高，难于实现自动化。磁珠法是较为常用的核酸提取方法，且普遍认为其对病原体的核酸提取具有简便、高效、提取浓度、纯度较高等优势。另外，不同的提取方法因其提取产物浓度、纯度的差别以及