一种西他列汀中间体的生物合成方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113801903A(43)申请公布日2021.12.17(21)申请号202111277892.6(22)申请日2021.10.30(71)申请人江苏八巨药业有限公司地址224555江苏省盐城市滨海经济开发区沿海工业园(72)发明人程加铭卢文才汪东海顾学新胡建涛张锦涛(74)专利代理机构台州市方信知识产权代理有限公司33263代理人郭斌斌(51)Int.Cl.C12P17/18(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页(54)发明名称一种西他列汀中间体的生物合成方法(57)摘要本发明涉及一种西他列汀中间体的生物合成方法，属于药物中间体合成技术领域。为了解决现有的不易处理和污染大的问题，提供一种西他列汀中间体的生物合成方法，包括在无机碱存在下，在非水溶性溶剂中使式Ⅱ化合物4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑5‑氧代丁酸与式Ⅲ化合物3‑(三氟甲基)‑5,6,7,8‑四氢‑[1,2,4]三唑并[4,3‑a]吡嗪或其盐酸盐在催化量的酰胺合酶(蛋白序列如SEQIDNO.1的催化作用下进行酶催化反应，得到产物式Ⅰ化合物西他列汀中间体。本发明具有产物的转化率高，且高产物收率。CN113801903ACN113801903A权利要求书1/1页1.一种西他列汀中间体的生物合成方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：在无机碱存在下，在非水溶性溶剂中使式Ⅱ化合物4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑5‑氧代丁酸与式Ⅲ化合物3‑(三氟甲基)‑5,6,7,8‑四氢‑[1,2,4]三唑并[4,3‑a]吡嗪或其盐酸盐在催化量的酰胺合酶的催化作用下进行酶催化反应，得到产物式Ⅰ化合物西他列汀中间体：所述酰胺合酶的蛋白序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述西他列汀中间体的生物合成方法，其特征在于，所述酰胺合酶的加入量为80g/L～100g/L。3.根据权利要求1所述西他列汀中间体的生物合成方法，其特征在于，所述酶催化反应的温度为35℃～45℃。4.根据权利要求1所述西他列汀中间体的生物合成方法，其特征在于，所述酶催化反应的过程中控制反应体系的pH值为8.0～8.5。5.根据权利要求1‑4任意一项所述西他列汀中间体的生物合成方法，其特征在于，所述无机碱选自氢氧化钠或氢氧化钾。6.根据权利要求1‑4任意一项所述西他列汀中间体的生物合成方法，其特征在于，所述非水溶性溶剂选自乙酸乙酯、二甲基叔丁基醚、二氯甲烷和氯仿中的一种或几种。7.根据权利要求1‑4任意一项所述西他列汀中间体的生物合成方法，其特征在于，所述式Ⅲ化合物3‑(三氟甲基)‑5,6,7,8‑四氢‑[1,2,4]三唑并[4,3‑a]吡嗪或其盐酸盐与式Ⅱ化合物4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑5‑氧代丁酸的摩尔比为1：1.0～1.25。2CN113801903A说明书1/6页一种西他列汀中间体的生物合成方法技术领域[0001]本发明涉及一种西他列汀中间体的生物合成方法，属于药物中间体合成技术领域。背景技术[0002]西他列汀，分子式为C16H15F6N5O,CAS号为4486460‑32‑6,是默沙东公司研制的第一个用于治疗Ⅱ型糖尿病的二肽基肽酶(DPP‑IV)抑制剂，它通过提高糖尿病患者自身胰岛β细胞产生的胰岛素的能力，在血糖升高时增加胰岛的分泌，从而控制糖尿病患者的血糖水平，且耐受性好、不增加体重，也不会出现低血糖的风险。随着人民生活水平的提高和人口老龄化速度的加快，全球糖尿病患者正在以非常惊人的速度增加，对糖尿病的治疗具有很大的意义，尤其是当前市场上占有巨大份额的II型糖尿病治疗的药物。[0003]在西他列汀的合成路线中中间体(2Z)‑4‑氧代‑4‑[3‑(三氟甲基)‑5,6‑二氢‑[1,2,4]三唑并[4,3‑a]吡嗪‑7‑(8H)‑基]‑1‑(2,4,5‑三氟苯基)丁‑2‑酮是关键的西他列汀中间体的合成。如现有的有公开的通过烯胺中间体经过不对称还原得到西他列汀，其合成的关键在于烯胺中间体的不对称氢化还原，由于反应过程中所用到的金属铑、二茂铁基双磷配体的价格都十分昂贵，且后续不易处理，不利于环境保护，不适合工业化的放大生产。发明内容[0004]本发明针对以上现有技术中存在的缺陷，提供一种西他列汀中间体的生物合成方法，解决的问题是如何提供一种新的绿色工艺，且具有较高的产物收率。[0005]本发明的目的是通过以下技术方案得以实现的，一种西他列汀中间体的生物合成方法，该方法包括以下步骤：[0006]在无机碱存在下，在非水溶性溶剂中使式Ⅱ化合物4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑5‑氧代丁酸与式Ⅲ化合物3‑(三氟甲基)‑5,6,7,8‑四氢‑[1,2,4]三唑并[4,3‑a]吡嗪或其盐酸盐在催化量的酰胺合酶的催化作用下进行酶催化反应，得