一种切向流超滤纯化15价肺炎球菌多糖蛋白结合物的工艺方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113980104A(43)申请公布日2022.01.28(21)申请号202111241847.5(22)申请日2021.10.25(71)申请人北京智飞绿竹生物制药有限公司地址100176北京市大兴区经济技术开发区（亦庄）同济北路22号申请人重庆智飞生物制品股份有限公司安徽智飞龙科马生物制药有限公司(72)发明人曾力平赵林飞姜真赵常帅朱卫华杜琳(74)专利代理机构北京华科联合专利事务所(普通合伙)11130代理人王为(51)Int.Cl.C07K14/315(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图3页(54)发明名称一种切向流超滤纯化15价肺炎球菌多糖蛋白结合物的工艺方法(57)摘要本发明提供了一种切向流超滤纯化15价肺炎球菌多糖蛋白结合物的工艺方法，所述步骤采用不同膜包孔径、超滤倍数、维持体积、跨膜压差、清洗次数等切向流超滤工艺参数去除1、2、3、4、5、6A、6B、7F、9V、12F、14、18C、19A、19F、23F型共15种肺炎球菌多糖蛋白结合物中间样品中的小分子化合物，缩短超滤时间，减少原料损耗，提高回收率，超滤结束后的膜包采用碱溶液处理，水通量能快速的恢复到初始值，简单快捷效率高。该方法纯化过程中所用液体只需0.85％氯化钠溶液，在疫苗生产过程中，0.85％氯化钠溶液是常用溶剂，产品质量安全性好，且能降低浓缩透析等操作过程中膜的穿透渗漏等风险，能防止生产过程中产品因泄露导致的环境污染和人员危险事件的发生，适用于多种疫苗制备领域，生产成本低、效率高，有良好的经济价值。CN113980104ACN113980104A权利要求书1/2页1.一种切向流超滤15价肺炎球菌多糖蛋白结合物的纯化方法，包括以下步骤：(1)用纯化水冲洗切向流超滤系统；(2)取肺炎球菌多糖蛋白结合物中间产品，用0.85％氯化钠溶液先稀释后浓缩维持一定的体积，使用切向流超滤膜包进行超滤；(3)浓缩样品并收集，用0.85％氯化钠溶液加压循环清洗系统并收集清洗液；(4)用0.3mol/L氢氧化钠加压循环冲洗系统，纯化水冲洗并测水通量合格后用0.1mol/L氢氧化钠溶液保存。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤1)先将膜包中的保存液排空，用纯化水冲洗切向流超滤系统，进料泵速为150～400rpm,调节回流阀使进出口压为0.05～0.15MPa,冲洗10～30分钟，直至透过液与回流液pH值为中性即可。3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤2)：切向流超滤膜包孔径为10～100KD，V流道，超滤前样品先稀释后浓缩，至样品粘度达到目标粘度范围，进料泵速150～400rpm，调节回流阀使TMP为0.10～0.15MPa，超滤用水为0.85％氯化钠溶液，超滤倍数为10～40倍。4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤3)：浓缩样品时，降低进料流速使TMP≤0.15MPa，直至样品体积≤最终所需体积1/3后收集浓缩液，用0.85％氯化钠溶液加压循环冲洗该系统3～5分钟后收集，重复清洗1～3次。5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤4)：超滤结束后，用1～2L0.1～0.5mol/L氢氧化钠溶液冲洗超滤系统后，再用0.1～0.5mol/L氢氧化钠溶液加压循环冲洗系统，进料泵速150～400rpm，TMP0.05～0.15MPa，循环10～30分钟后排空，纯化水冲洗超滤系统10～30分钟，直至透过液与回流液pH值为中性，测水通量合格后用0.1mol/L氢氧化钠溶液保存。6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：先用纯化水冲洗切向流超滤系统；10mg/ml肺炎球菌荚膜多糖经0.5mol/L冰醋酸水解72h、10mmol/L高碘酸钠氧化6h,加入甘油终止反应，切向流超滤纯化得到肺炎球菌多糖氧化物，即样品；切向流超滤膜包孔径为30KD，V流道，样品用0.85％氯化钠稀释3倍，进料泵速400rpm，调节回流阀使样品体积浓缩至300ml，TMP为0.15MPa，维持体积超滤10倍，样品体积浓缩至100ml后收集，用100ml0.85％氯化钠加压循环清洗膜包并收集，重复两次；超滤结束后用1L0.3mol/L氢氧化钠溶液冲洗系统，2L0.3mol/L氢氧化钠溶液加压循环冲洗系统，进料泵速200rpm，TMP0.1MPa，循环20分钟后排空，纯化水冲洗系统至透过液与回流液pH值为中性，测水通量并用0.1mol/L氢氧化钠溶液保存。7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：先用纯化水冲洗切向流超滤系统；10mg/ml白喉类毒素加入0.25mol/LADH与0.02mol/LEDAC反应4