一种蒜氨酸的分离纯化方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114478331A(43)申请公布日2022.05.13(21)申请号202210144624.5(22)申请日2022.02.17(71)申请人齐鲁工业大学地址250399山东省济南市长清区大学路3501号(72)发明人卢艳敏崔波王娜柴晴晴(74)专利代理机构济南泉城专利商标事务所37218专利代理师李桂存(51)Int.Cl.C07C315/06(2006.01)C07C317/48(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种蒜氨酸的分离纯化方法(57)摘要本发明属于天然产物的分离纯化领域，具体涉及一种蒜氨酸的分离纯化方法。前期通过双水相处理，后采用醇沉除去多糖、无机盐；然后采用30%磷酸二氢钠‑乙醇‑丙酮为溶剂体系，通过高速逆流色谱（HSCCC）对蒜氨酸进行分离纯化，该方法具有操作简便对样品的前处理要求低，耗时短，处理量大、不存在吸附、降解和污染回收率高等优势。CN114478331ACN114478331A权利要求书1/1页1.一种蒜氨酸的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采用硫酸铵、氯化钠、正丙醇、pH为2.4伯瑞坦‑罗比森缓冲溶液组成的双水相体系，处理灭酶蒜粉，下相即为粗提液；（2）向步骤（1）的粗提液通过醇沉除去多糖、无机盐，离心，将上清液减压回收乙醇，烘干，得蒜氨酸粗提物固体粉末；（3）采取30%磷酸二氢钠‑乙醇‑丙酮为溶剂体系，取步骤（2）的固体粉末加入到已达到平衡之后的溶剂系统中，并超声使其完全溶解后，从进样阀中注入高速逆流色谱仪，采用高速逆流色谱仪进行纯化。2.根据权利要求1所述的蒜氨酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤（3）溶剂体系的30%磷酸二氢钠‑乙醇‑丙酮的体积比为6:3:1.5。3.根据权利要求1所述的蒜氨酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤（3）的溶剂体系平衡后分为上下两相，上相作为高速逆流色谱仪的固定相，下相为高速逆流色谱仪的流动相。4.根据权利要求3所述的蒜氨酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤（2）的固体粉末加入到已达到平衡之后的上、下两相溶剂系统，并超声使其完全溶解；所述的固体粉末与上、下两相溶剂的加入量比值为400mg:10mL:10mL。5.根据权利要求1‑4任一所述的蒜氨酸的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤（3）中高速逆流色谱仪的具体参数为：将固定相以20mL/min的流速泵入高速逆流色谱仪的螺旋管中，待固定相充满螺旋管后，开启高速逆流色谱仪，调整转速为1050rpm，同时流动相以1.8mL/min的流速泵入充满固定相后的螺旋管中，待末端有流动相流出时，即螺旋管中上下相已达到动态平衡：然后将备好的样品溶液从进样阀中注入高速逆流色谱仪，经过0min收集到目标馏分。高速逆流色谱分离后，在25~36.根据权利要求1所述的蒜氨酸的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤（1）中双水相体系为：19%(w/w)硫酸铵/8.54%(w/w)氯化钠/20%(w/w)正丙醇/pH为2.4伯瑞坦‑罗比森缓冲溶液组成的双水相体系。2CN114478331A说明书1/4页一种蒜氨酸的分离纯化方法技术领域[0001]本发明属于天然产物的分离纯化领域，具体涉及一种蒜氨酸的分离纯化方法。背景技术[0002]通过天然提取的方式获得的蒜氨酸粗提液中会掺杂大量的大蒜多糖物质及少量水溶性蛋白质。因此，对蒜氨酸进行分离纯化和精制显得很有必要，目前研究较多是离子交换柱色谱法分离纯化蒜氨酸。但作为固定相的离子交换树脂具有传质较慢、柱效低离子、易溶胀和收缩、不耐高压等缺点。这些问题限制了蒜氨酸的高效制备，开发新型高效的制备技术意义深远。发明内容[0003]本专利采用的高速逆流色谱（HSCCC）技术是一种较新型的液—液分配色谱，具有操作简便对样品的前处理要求低，耗时短，处理量大、不存在吸附、降解和污染回收率高等优势。[0004]本发明的技术方案如下：一种蒜氨酸的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采用硫酸铵、氯化钠、正丙醇、pH为2.4伯瑞坦‑罗比森缓冲溶液组成的双水相体系，处理灭酶蒜粉，下相即为粗提液；（2）向步骤（1）的粗提液通过醇沉除去多糖、无机盐，离心，将上清液减压回收乙醇，烘干，得蒜氨酸粗提物固体粉末；（3）采取30%磷酸二氢钠‑乙醇‑丙酮为溶剂体系，取步骤（2）的固体粉末加入到已达到平衡之后的溶剂系统中，并超声使其完全溶解后，从进样阀中注入高速逆流色谱仪，采用高速逆流色谱仪进行纯化。[0005]优选地，步骤（3）溶剂体系的30%磷酸二氢钠‑乙醇‑丙酮的体积比为6:3:1.5。[0006]优选地，步骤（3）的溶剂体系平衡后分为上下两相，上相作为高速逆流色谱仪的固定相，下相为高速逆流色谱仪的流动相。[0007]优选地，步骤（