一种弹性蛋白肽及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114573682A(43)申请公布日2022.06.03(21)申请号202210228953.8(22)申请日2022.03.08(71)申请人华南理工大学地址510640广东省广州市天河区五山路381号(72)发明人崔春李清岚(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102专利代理师江裕强(51)Int.Cl.C07K14/78(2006.01)C12P21/06(2006.01)C12N9/94(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图1页(54)发明名称一种弹性蛋白肽及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种弹性蛋白肽及其制备方法。以弹性蛋白为原料，添加水和胰酶，低温混合处理一定时间后，去除上清液得到沉淀；将沉淀与水混合，调节溶液pH值，升温，酶解，灭酶，离心，浓缩，干燥，即得到弹性蛋白肽。本发明方法所制备的弹性蛋白肽具有较高的蛋白回收率和弹性蛋白酶抑制活性，且能回收部分蛋白酶。CN114573682ACN114573682A权利要求书1/1页1.一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤(1)：将弹性蛋白与水混合，加入胰酶，在0～25℃混合30～120min，离心，去除上清液得到沉淀；步骤(2)：将沉淀与水混合，调节溶液pH值，升温，水解，灭酶，离心，浓缩，干燥，得弹性蛋白肽。2.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述弹性蛋白来源于牛动脉、金枪鱼心脏动脉球、牛肺部、猪肺部、牛软骨、猪软骨、牛筋、猪动脉、牛颈韧带中任意一种。3.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述弹性蛋白的制备方法为牛动脉、金枪鱼心脏动脉球、牛肺部、猪肺部、牛软骨、猪软骨、牛筋、猪动脉、牛颈韧带中任意一种与5～10倍质量的0.05～0.1mol/L氢氧化钠溶液混合，85～95℃加热30～60min，取沉淀水洗至中性，干燥，即为弹性蛋白。4.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述弹性蛋白与水的质量比为1:8～1:15。5.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述加入胰酶为弹性蛋白质量的0.1％～2％。6.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述灭酶的条件为：80～100℃加热10～30min。7.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述离心的条件为：5000～10000g离心10～30min。8.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述沉淀与水的质量比为1:5～1:15；所述调节溶液pH值至7.0～9.0。9.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述升温至37～55℃；所述水解的时间为3～24h。10.权利要求1～9任一项所述一种弹性蛋白肽的制备方法制备得到的一种弹性蛋白肽。2CN114573682A说明书1/8页一种弹性蛋白肽及其制备方法技术领域[0001]本发明属于畜禽及水产加工副产物的高值化利用领域，具体涉及一种弹性蛋白肽及其制备方法。背景技术[0002]弹性蛋白是一种存在于多个结缔组织(皮肤、心脏动脉、肺、软骨)中的重要结构，由成纤维细胞和角质形成细胞合成分泌，具有良好的弹性和独特的生理功能。虽然弹性蛋白仅占皮肤总蛋白含量的2～4％，但它对皮肤结构和功能的维持至关重要，可提供皮肤抗拉强度和持久弹性。弹性蛋白不溶于水、弱酸或弱碱溶液。从氨基酸组成来看，弹性蛋白富含甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸等非极性氨基酸，通常以含有大量的3‑9个氨基酸组成的重复序列，形成灵活且稳定的结构。[0003]在皮肤老化过程中，基质金属蛋白酶的上调导致了明显的弹性蛋白或胶原蛋白的降解，加速皮肤弹性劣变，加速皮肤老化。弹性蛋白酶是基质金属蛋白酶的一种，可通过降解各种细胞外基质成分并激活其他MMP来加速皮肤细胞基质蛋白水解，从而造成皮肤老化。因此，抑制弹性蛋白酶活性是弹性蛋白肽的重要生理活性。刘洋利用Alcalase水解牛弹性蛋白，得到得到了其序列分别为PY,GLPY,GLGPGV和GPGGVGAL四种多肽。通过对以上肽段分子化学合成，进一步发现四条肽段中GLPY的弹性蛋白酶抑制活性最强，在10mM浓度下抑制率为58.77％，其次为GPGGVGAL和GLGPGVG，PY的弹性蛋白酶抑制活性最弱。除GLGPGVG对弹性蛋白酶的抑制类型属于竞争性抑制外，其他三个多肽均为混合抑制类型。GLPY对弹性蛋白酶具有最强的亲和力(6.4kcal/mol)，其与弹性蛋白酶之间可形成5个键长较短的氢键，这可能是其具有最佳弹性蛋白酶抑制活