一种芳香胺类化合物的酶催化合成方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114645068A(43)申请公布日2022.06.21(21)申请号202011520997.5(22)申请日2020.12.21(71)申请人上海合全药物研发有限公司地址200120上海市浦东新区自由贸易试验区德林路90号79#楼2-5层申请人上海合全药业股份有限公司(72)发明人程鹏飞王泽宇朱景仰(74)专利代理机构上海弼兴律师事务所31283专利代理师王卫彬黄益澍(51)Int.Cl.C12P13/00(2006.01)C12P17/10(2006.01)C12P17/12(2006.01)C12N9/04(2006.01)C12N9/02(2006.01)权利要求书3页说明书11页附图4页(54)发明名称一种芳香胺类化合物的酶催化合成方法(57)摘要本发明提供了一种芳香胺类化合物的酶催化合成方法，其包括以下步骤：在辅酶的存在下，芳香族硝基化合物经酶催化反应得到相应的芳香胺类化合物，所述酶为来源于大肠杆菌的NAD(P)H黄素氧化还原酶，具体内容见正文。该方法条件温和，常温常压反应，无重金属，廉价环保，且反应时间短，操作简单，反应速度快；可从芳香族硝基化合物一步得到目标芳香胺类化合物，相比已有报道具有底物浓度高，产品收率高，纯度高的特点。CN114645068ACN114645068A权利要求书1/3页1.一种芳香胺类化合物的酶催化合成方法，其特征在于，其包括以下步骤：在辅酶的存在下，底物经酶催化反应得到所述芳香胺类化合物，催化反应的通式如下所示：Ar‑NO2→Ar‑NH2所述Ar为未被取代的苯基或5～6元杂芳基，或被1个、2个或3个R1取代的苯基，或被1个、2个或3个R2取代的5～6元杂芳基，所述杂芳基的杂原子数量为1个、2个或3个，所述杂芳基中的杂原子选自氮、氧、硫中的一种或多种；12所述R、R独立地为：卤素，或C1‑C4的烷基，或或羟基，或巯基，或羰基，或1‑11‑2被1个、2个或3个R取代的C1‑C4的烷基，或C1‑C4的烷氧基，或被1个、2个或3个R取代的C1‑1‑31‑4C4的烷氧基，或苄基，或被1个、2个或3个R取代的苄基、或苄氧基，或被1个、2个或3个R取代的苄氧基；1‑11‑21‑31‑4所述R、R、R和R独立地为：卤素、C1‑C4的烷基、C1‑C4的烷氧基、苄基、苄氧基、羟基、巯基或羰基；1‑1‑11‑1‑2所述R、R独立地为氢或C1‑C4的烷基；其中，所述酶为来源于大肠杆菌的NAD(P)H黄素氧化还原酶。2.如权利要求1所述的芳香胺类化合物的酶催化合成方法，其特征在于，所述底物与所述NAD(P)H黄素氧化还原酶的质量比为1:(0.1‑5)，例如为1:0.1、1:0.3或1:0.5；和/或，所述辅酶为氧化型辅酶或其盐，或还原型辅酶；所述氧化型辅酶或其盐为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐，所述还原型辅酶为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；和/或，所述底物与所述辅酶的质量比为1:(0.001‑0.1)，例如为1:0.001、1:0.01或1:0.1；和/或，所述Ar为未被取代的5～6元杂芳基、或被1个或2个R1取代的苯基，或被1个R2取代的5～6元杂芳基，所述杂芳基的杂原子数量为1个或2个，所述杂芳基中的杂原子为氮；12所述R、R独立地为未被取代的以下基团：卤素、C1‑C4的烷氧基、苄基、或羰基；所述R1‑1‑1、R1‑1‑2独立地为氢或叔丁基。3.如权利要求1所述的芳香胺类化合物的酶催化合成方法，其特征在于，当所述Ar为未被取代的5～6元杂芳基时，所述未被取代的5～6元杂芳基为和/或，当所述Ar为被1个或2个R1取代的苯基时，所述R1为氯或叔丁基磺酰胺基，较佳2CN114645068A权利要求书2/3页地，所述被1个或2个R1取代的苯基为和/或，当所述Ar为被1个R2取代的5～6元杂芳基时，所述5～6元杂芳基为所述R2为羰基或苄基，较佳地，所述被1个R2取代的5～6元杂芳基为4.如权利要求3所述的芳香胺类化合物的酶催化合成方法，其特征在于，所述Ar选自以下结构：5.如权利要求4所述的芳香胺类化合物的酶催化合成方法，其特征在于，所述催化反应中还包含缓冲液；和/或，所述催化反应中还包含助溶剂。6.如权利要求5所述的芳香胺类化合物的酶催化合成方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或三乙醇胺缓冲液；和/或，所述缓冲液的浓度为0.05‑1moL/L；和/或，所述缓冲液的pH为5‑9；和/或，所述缓冲液与所述底物的体积质量比为(5‑100)mL/g；和/或，所述助溶剂为异丙醇、N,N‑二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、四氢呋喃