一种生物酶催化合成L-肌肽的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115521956A(43)申请公布日2022.12.27(21)申请号202211294445.6(22)申请日2022.10.21(71)申请人江苏诚信药业有限公司地址226200江苏省南通市启东滨江精细化工园区申请人厦门金达威集团股份有限公司(72)发明人邢小飞焉世杰李俊松祝俊邢飞徐飞(74)专利代理机构北京品源专利代理有限公司11332专利代理师刘二艳(51)Int.Cl.C12P17/10(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种生物酶催化合成L-肌肽的方法(57)摘要本发明提供一种生物酶催化合成L‑肌肽的方法，所述方法包括以下步骤：在生物酶和微孔聚合物存在下，L‑组氨酸与β‑丙氨酸反应得到L‑肌肽，本发明通过利用生物酶和微孔聚合物的共同作用，使得L‑组氨酸与β‑丙氨酸可以经过一步反应得到L‑肌肽，并且具有高的产物收率以及高的产物纯度，L‑肌肽的收率高达85‑95％，纯度高达99％以上。CN115521956ACN115521956A权利要求书1/1页1.一种生物酶催化合成L‑肌肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：在生物酶和微孔聚合物存在下，L‑组氨酸与β‑丙氨酸反应得到L‑肌肽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物酶为氨肽酶。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述微孔聚合物包括共价有机骨架COF、超交联多孔离子聚合物HCP、共轭微孔聚合物CMP、固有微孔性聚合物PIM、三嗪骨架CTF或多孔芳族骨架PAF中的任意一种，优选超交联多孔离子聚合物HCP。4.根据权利要求1‑3中任一项所述的方法，其特征在于，所述L‑组氨酸与生物酶的质量比为1:0.1‑1:1.1。5.根据权利要求1‑4中任一项所述的方法，其特征在于，所述L‑组氨酸与微孔聚合物的质量比为1:0.02‑1:0.13；优选地，L‑组氨酸与β‑丙氨酸的摩尔比为1:0.5‑1:2。6.根据权利要求1‑5中任一项所述的方法，其特征在于，所述反应在碱存在下进行，所述碱为有机碱或无机碱。优选地，所述有机碱包括三乙胺、甲醇钠、乙醇钠或氢氧化季铵盐中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述无机碱包括氨水、氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述碱的用量为L‑组氨酸质量的0.95‑1.65倍。7.根据权利要求1‑6中任一项所述的方法，其特征在于，所述反应中反应体系的pH为5‑12。8.根据权利要求1‑7中任一项所述的方法，其特征在于，所述反应的溶剂为水；优选地，所述反应的温度为10‑50℃，反应的时间为3‑24h。9.根据权利要求1‑8中任一项所述的方法，其特征在于，反应结束后，将生物酶进行失活，而后进行过滤，减压浓缩去除溶剂，而后进行析晶、打浆、洗涤、干燥，得到L‑肌肽。10.根据权利要求1‑9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：在氨肽酶和微孔聚合物存在下，L‑组氨酸与β‑丙氨酸在碱存在下，10‑50℃下反应3‑24h，所述L‑组氨酸与生物酶的质量比为1:0.1‑1:1，所述L‑组氨酸与微孔聚合物的质量比为1:0.02‑1:0.13，L‑组氨酸与β‑丙氨酸的摩尔比为1:0.5‑1:2，反应结束后，将生物酶进行失活，而后进行过滤，减压浓缩去除溶剂，而后进行析晶、打浆、洗涤、干燥，得到L‑肌肽。2CN115521956A说明书1/6页一种生物酶催化合成L‑肌肽的方法技术领域[0001]本发明属于药物制备领域，涉及一种生物酶催化合成L‑肌肽的方法。背景技术[0002]L‑肌肽(β‑丙氨酰‑L‑组氨酸)是一种重要的天然二肽，可以保护脑血管内皮细胞免受丙二醛所诱导的氧化毒性，它是一种抗衰老药物，受到人们的广泛青睐。目前制备L‑肌肽的方法主要依靠的还是化学合成，主要方法有：1.酰基叠氮法；2.酰基氨解法；3.酸酐氨解法；4.二氢‑1,3‑噻唑‑2,4二酮法；5.N‑羟基丁二酰亚胺法，化学法存在反应路线长，反应条件苛刻，选择性差，易生成副产物，产物纯度低，收率低，需用到昂贵的试剂，成本较高等不足；此外，大量有机溶剂的使用还会造成环境污染。[0003]CN107217048A公开了采用氨肽酶催化β‑丙氨酸甲酯与L‑组氨酸合成L‑肌肽，该方法在生成L‑肌肽的同时也会形成一定量的三肽杂质，导致反应产物复杂，提取纯化困难，L‑肌肽收率也比较的低。[0004]CN109609536A公开了利用全细胞催化合成L‑肌肽，该方法生成的反应液杂质比较的多，也有EDTA和大量的硼酸盐等，在后期分离的过程中比较复杂，需要对这些杂质逐一地进行分离，在一定的程度上会降低收率，提高生成成本。[0005]CN106366158A和CN10636615