一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115615791A(43)申请公布日2023.01.17(21)申请号202211265705.7(22)申请日2022.10.17(71)申请人吉林化工学院地址132022吉林省吉林市龙潭区承德街45号(72)发明人邹继颖刘辉魏嘉王建超(74)专利代理机构重庆聚为捷知识产权代理事务所(普通合伙)50297专利代理师黄海鸥(51)Int.Cl.G01N1/34(2006.01)权利要求书1页说明书2页附图1页(54)发明名称一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法(57)摘要本发明公开了一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，本发明通过采用浸泡浮选、振荡分离及过滤清洗方法来对土壤中负载生物膜微塑料进行提取，改进传统方法，具有保持颗粒表面原有微生物组成与结构、操作时间短、操作简单、回收率高等优点，有效避免传统的试验方法不足之处，改善了操作可能会破坏微塑料颗粒表面生物膜的结构与组成，进而改变其性质与功能；所用装置结构复杂，操作繁琐的问题。CN115615791ACN115615791A权利要求书1/1页1.一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1灭菌：将提取仪器进行灭菌处理；S2浸泡浮选：采用超净工作台，取土壤样本放入离心管中，加入无菌水浸泡使土壤变得松软，成稀泥状，再浮选微塑料；S3振荡分离：将装有样本的离心管放入进行振荡处理，使微塑料颗粒从土壤颗粒中脱落，完毕后将离心管进行离心处理，使微塑料与土壤分离；S4过滤清洗：在超净工作台内，将离心后的上清液倒入布氏漏斗用无菌滤膜进行抽滤，同时用无菌水冲洗布氏漏斗内壁附着的微塑料颗粒，再用灭菌水清洗微塑料表面，去除微塑料表面附着的杂质或浮游微生物；S5收集颗粒：用无菌药匙刮下滤膜上附的微塑料颗粒，装入无菌离心管中，放入冰箱冷藏，待进一步分析表面生物膜。2.根据权利要求1所述一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，其特征在于：步骤S1中所述提取仪器为玻璃仪器、离心管、药匙、布氏漏斗等仪器。3.根据权利要求1所述一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，其特征在于：步骤S2中所述土壤样本为10g，离心管采用100ml，加50ml无菌水浸泡4h土壤，浮选微塑料20h。4.根据权利要求1所述一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，其特征在于：步骤S3中所述振荡处理的方法是采用振荡器，离心处理的方法是采用离心机。5.根据权利要求4所述一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，其特征在于：步骤S3中所述振荡方式为100r/min振荡60min，所述离心方式为4000r/min离心30min。6.根据权利要求1所述一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，其特征在于：步骤S4中所述无菌滤膜直径50mm、孔径0.45μm。7.根据权利要求1所述一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，其特征在于：步骤S4中所述灭菌水清洗微塑料表面次数为3次。8.根据权利要求1所述一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，其特征在于：步骤S5中所述无菌离心管采用10ml，冷藏温度为4℃。2CN115615791A说明书1/2页一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法技术领域[0001]本发明涉及土壤化学相关领域，尤其涉及一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法。背景技术[0002]微塑料污染问题已受到全球的关注。环境中微塑料不仅对生物的健康构成威胁，同时还可作为微生物的载体。土壤中的微生物附着在微塑料颗粒表面形成生物膜，这可能会改变微塑料原本的组成、结构、性质与功能等，因此分离提取附着生物膜的微塑料对于人们研究微塑料的环境行为和提供微塑料研究的基础数据等都是非常重要的。国内外关于土壤微塑料及其表面微生物或生物膜的研究还非常有限，且可用于分离土壤中负载生物膜微塑料方法还十分缺乏。因此，在我国开展土壤微塑料表面生物膜的形成及其对微塑料理化性质影响的研究以及有效分离土壤中负载生物膜微塑料的方法具有重要的科学价值和现实意义。[0003]土壤与微塑料分离的传统方法有盐溶液浮选法，主要分离步骤包含悬液搅拌、连续流动及气浮溢流几部分，传统的试验方法不足之处在于操作可能会破坏微塑料颗粒表面生物膜的结构与组成，进而改变其性质与功能；所用装置结构复杂，操作繁琐。发明内容[0004]因此，为了解决上述不足，本发明提供一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法。[0005]为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案：一种提取土壤中负载生物膜微塑料的方法，包括以下步骤：S1灭菌：将提取仪器进行灭菌处理；S2浸泡浮选：采用超净工作台，取土壤样本放入离心管中，加入无菌水浸泡使土壤变得松软，成稀泥状，再浮选微塑料；S3振荡分离：将装有样本的离心管放入进行振荡处理，使微塑料颗粒从土壤颗粒中脱落，完毕后将离心