一种人凝血因子IX纯化的二次超滤透析液及纯化方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115975997A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202211633932.0(22)申请日2022.12.19(71)申请人成都蓉生药业有限责任公司地址610000四川省成都市高新区起步园科园南路7号(72)发明人余伟陈川梁洪余鼎李伟卢杨利黄琰洪树青(74)专利代理机构成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)51222专利代理师肖柯岑全学荣(51)Int.Cl.C12N9/64(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称一种人凝血因子IX纯化的二次超滤透析液及纯化方法(57)摘要本发明提供了一种特定组成的二次超滤透析液，是含有如下组分的水溶液：0.1～0.18mol/L氯化钠、0.005～0.02mol/L枸橼酸钠、0.01～0.03mol/L盐酸精氨酸；所述二次超滤透析液的pH为6.5～7.4。本发明二次超滤透析液用于纯化人凝血因子IX，通过精简的纯化步骤即可获得收率和比活力高的人凝血因子IX，具有很好的推广应用前景。CN115975997ACN115975997A权利要求书1/2页1.一种人凝血因子IX纯化的二次超滤透析液，其特征在于，它是含有如下组分的水溶液：0.1～0.18mol/L氯化钠、0.005～0.02mol/L枸橼酸钠、0.01～0.03mol/L盐酸精氨酸；所述二次超滤透析液的pH为6.5～7.4。2.如权利要求1所述的二次超滤透析液，其特征在于，它是含有如下组分的水溶液：0.12mol/L氯化钠、0.02mol/L枸橼酸钠、0.02mol/L盐酸精氨酸；所述二次超滤透析液的pH为7.4。3.如权利要求1或2所述的二次超滤透析液，其特征在于，还包括0.01mol/L的盐酸赖氨酸和/或0.01mol/L的甘氨酸。4.权利要求1～3任一项所述的二次超滤透析液在人凝血因子IX纯化过程中的应用。5.一种人凝血因子IX纯化方法，其特征在于，包括二次超滤透析步骤，所述二次超滤透析步骤使用权利要求1～3任一项所述的二次超滤透析液进行。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述二次超滤透析步骤包括：使用不低于待透析人凝血因子IX样品的5倍体积的二次超滤透析液进行透析。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)预纯化；(2)S/D病毒灭活；(3)二次离子交换层析；(4)二次超滤透析；(5)亲和层析；(6)纳米过滤；其中，步骤(1)包括取去冷沉淀的上清血浆经DEAESephadexA50凝胶进行柱层析和超滤透析的步骤；步骤(3)包括经阴离子交换凝胶进行柱层析的步骤，所述阴离子交换凝胶是DiamondDEAE、CaptoDEAE、UniGel80DEAE、DEAESepharoseFF、DEAEToyopearl650M或HPDEAE60；步骤(5)包括经肝素亲和凝胶进行柱层析的步骤，所述肝素亲和凝胶是HeparinBestaroseFF、CaptoHeparin、HeparinsepharoseFF、UW90AgaroseHeparin或HeparinAgaroseFF。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述柱层析依次采用平衡液、洗涤液和洗脱液过凝胶柱，所述平衡液含0.06～0.12mol/LNaCl和0.005～0.02mol/L枸橼酸钠，pH值为7.0～7.4；所述洗涤液含0.17～0.23mol/LNaCl和0.005～0.02mol/枸橼酸钠，pH值为7.0～7.4；所述洗脱液含0.5～2.0mol/LNaCl和0.005～0.03mol/L枸橼酸钠，pH值为7.0～7.4；步骤(3)所述二次离子交换层析所用阴离子交换凝胶是DiamondDEAE，依次采用平衡液、洗涤液和洗脱液过凝胶柱，所述平衡液含0.005～0.025mol/L磷酸二氢钠、0.005～0.025mol/L磷酸氢二钠、0.10～0.20mol/LNaCl、0.005～0.02mol/L枸橼酸钠，pH值为6.0～7.5；所述洗涤液含0.005～0.025mol/L磷酸二氢钠、0.005～0.025mol/L磷酸氢二钠、0.20～0.30mol/LNaCl、0.005～0.020mol/L枸橼酸钠，pH值为6.0～7.5；所述洗脱液含0.005～0.025mol/L磷酸二氢钠、0.005～0.025mol/L磷酸氢二钠、0.33～0.40mol/LNaCl、0.005～0.02mol/L枸橼酸钠，pH值为6.0～7.5；步骤(5)所述亲和层析所用肝素亲和凝胶是HeparinBestaroseFF，依次采用平衡液、洗涤液和洗脱液过凝胶柱，所述平衡液含有0.01～0.03mol/L枸橼酸钠，pH值为7.0～8.0；所述洗涤液含