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本发明公开了过表达α?LA的重组载体、过表达α?LA的细胞系、外泌体以及利用工程化改造后富集α?乳清蛋白的乳腺癌源外泌体制备的纳米疫苗及其制备方法和应用。本发明的纳米疫苗通过α?乳清蛋白特异性靶向肿瘤组织,诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡并释放肿瘤相关抗原、Hiltonol和损伤相关的分子模式(DAMPs),原位激活1型常规树突状细胞,进而引发强大的肿瘤特异性CD8+T细胞反应,表现出有效的抗肿瘤活性。本发明的纳米疫苗为靶向杀伤肿瘤细胞提供新方法,为原位激活1型常规树突状细胞提供新模式,为改善乳腺癌的免疫治疗提供新思路。