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本发明涉及多氧齐墩果烷型三萜类化合物亚乎奴三萜C的制备方法及其应用,有效解决从亚乎奴中制备多氧齐墩果烷型三萜类化合物亚乎奴三萜C,实现在制备抗肿瘤药物中的应用问题,亚乎奴用乙醇加热回流提取,减压回收乙醇,将乙醇提取物混悬于蒸馏水中,依次以石油醚、二氯甲烷、正丁醇萃取;将二氯甲烷萃取部位经硅胶柱色谱分离,用石油醚?丙酮混合溶剂系统梯度洗脱,得到组份Fr.1?Fr.5;组份Fr.4经MCI柱色谱,甲醇?水梯度洗脱,收集亚组份Fr.4?1~Fr.4?5;亚组份Fr.4?3经硅胶柱色谱分离,石油醚?乙酸乙酯梯度洗脱,得到组份Fr.4?3?1~Fr.4?3?5;组份Fr.4?3?3经制备型高效液相色谱纯化,收集保留时间为57min的色谱峰,回收溶剂,得亚乎奴三萜C。