一种人源化肠炎小鼠模型的构建方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115843745A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202111132244.1(22)申请日2021.09.26(71)申请人泰州迈博太科药业有限公司地址225300江苏省泰州市健康大道803号(72)发明人王皓陶静张大鹏郭清城李晶李继阳李伟龚慧张浔敏(51)Int.Cl.A01K67/027(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图6页(54)发明名称一种人源化肠炎小鼠模型的构建方法(57)摘要本发明提供了一种人源化肠炎小鼠模型的构建方法，用人外周血单个核细胞与免疫缺陷小鼠构建人源化小鼠，再用葡聚糖硫酸钠诱导所述人源化小鼠得到人源化肠炎小鼠模型。本发明提供的人源化肠炎小鼠模型构建方法，使用申请人掌握成熟的用人PBMC移植法重建重度免疫缺陷小鼠的步骤，加上操作简单的DSS自然饮水法，既避免了实验小鼠的高死亡率，同时不减弱病理反应，不影响模型的药学应用，克服了现有技术中DSS的毒性导致实验小鼠死亡率高的缺陷，有较高的应用推广价值。CN115843745ACN115843745A权利要求书1/1页1.一种人源化肠炎小鼠模型的构建方法，其特征在于包含以下步骤，1)用人外周血单个核细胞(PBMC)与免疫缺陷小鼠构建人源化小鼠；2)用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导所述人源化小鼠得到人源化肠炎小鼠模型。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫缺陷小鼠是重度免疫缺陷(NSG)小鼠，所述肠炎是溃疡性肠炎(UC)。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述小鼠是NCG小鼠；优选的，所述小鼠是是SPF级雌性7周龄NOD‑Prkdcem26Il2rgem26小鼠。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DSS是质量百分比为2％的DSS溶液。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述诱导方法是自然饮水法；优选的，步骤2)中所述诱导方法是以质量百分比为2％的DSS溶液自然饮水7‑9天。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述人源化小鼠的构建方法是腹腔注射法；优选的，步骤1)中所述人源化小鼠的构建方法是取人抗凝全血进行淋巴细胞分离后重悬于PBS中并腹腔注射于小鼠，所述注射剂量为0.5ml/只。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人源化肠炎小鼠模型用于构建人T细胞肠道归巢模型。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述人源化肠炎小鼠模型用于构建整合素α4β7拮抗人T细胞肠道归巢模型。9.如权利要求1‑8任一项所述的方法，其特征在于，所述模型在急慢性溃疡性结肠炎及结肠炎癌转化相关的治疗药物的临床前药学评价中的应用。2CN115843745A说明书1/8页一种人源化肠炎小鼠模型的构建方法技术领域[0001]本发明涉及动物模型的构建方法，特别涉及一种人源化肠炎小鼠模型的构建方法。背景技术[0002]溃疡性结肠炎(UlcerativeColitis，UC)是一种慢性炎症疾病，特点表现为直肠与结肠中的连续黏膜溃疡，起始于直肠，不同程度地扩展，最长可以蔓延到盲肠，其临床表现为腹泻、间断性便血或脓血便、腹痛、呕吐等。但是，其病因至今仍未确定，普遍认为是受到环境、遗传和肠道微生物等因素的影响。在新药研发的过程中，溃疡性肠炎的动物模型是必需的工具。[0003]现有的溃疡性结肠炎(UC)模型常见的动物模型主要为：葡聚糖硫酸钠(DSS)模型、2，4，6‑三硝基苯磺酸(TNBS)模型，其中葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发的小鼠模型是应用最为广泛的动物模型。DSS诱导的结肠炎模型其发病机制DSS是由蔗糖合成的硫酸多糖体，其诱导结肠炎的机制可能与影响DNA合成，通过各种途径造成T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等激活，引起细胞因子表达改变，导致肠上皮屏障破坏有关。DSS结肠炎表现为浅表性、局灶性炎症和溃疡，全结肠均可发病，炎症主要累及黏膜层和黏膜下层。但是，DSS急性结肠炎模型制作过程中动物死亡率高，停药后8～9d症状自然恢复，影响药物疗效观察，因此适用于发病机制的研究。[0004]然而，经典的DSS诱导结肠炎小鼠模型是ー个急性的溃疡性肠炎模型，小鼠会有严重的肠道溃疡性病变，包括水肿、腹泻和便血。在这个模型中，因为葡聚糖硫酸钠的毒性，小鼠病变非常严重，很多的情况下会导致死亡，甚至死亡率可高达20％到40％，使得这ー模型极不稳定。降低葡聚糖硫酸钠的浓度可以避免动物死亡，但是病理反应同时减弱，使模型的应用受到限制。为了达到在小鼠模型中研究拮抗人T细胞肠道归巢的目的，如采用结肠静脉注射CFSE染色后的人PBMC细胞，取结肠进行固有层分离的建模方式，难点在于不同固有层分离方法下，流式细胞结果都不甚理想，所以需要一种稳定的人源肠炎小鼠DSS诱导模型。发明内容[0005]为