经修饰的表皮生长因子受体及其在追踪细胞中的用途.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115867569A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202180047896.7(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所(22)申请日2021.05.1411105专利代理师凃滔(30)优先权数据2007169.22020.05.14GB(51)Int.Cl.C07K14/705(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2023.01.04(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2021/0628732021.05.14(87)PCT国际申请的公布数据WO2021/229075EN2021.11.18(71)申请人圣拉斐尔医院有限责任公司地址意大利米兰申请人特莱索恩基金会(72)发明人L.纳尔迪尼P.杰诺维斯V.瓦瓦索里权利要求书2页说明书45页附图10页(54)发明名称经修饰的表皮生长因子受体及其在追踪细胞中的用途(57)摘要包含编码表皮生长因子受体(EGFR)胞外表位的核苷酸序列的多核苷酸，该表皮生长因子受体胞外表位可操作地连接至：(a)NGFR或GMSSFRα信号肽；(b)EGFR或NGFR跨膜结构域；和/或(c)NGFR或EGFR细胞质尾。CN115867569ACN115867569A权利要求书1/2页1.多核苷酸，其包含编码表皮生长因子受体(EGFR)胞外表位的核苷酸序列，所述表皮生长因子受体胞外表位可操作地连接至：(a)NGFR或GMSSFRα信号肽；(b)EGFR或NGFR跨膜结构域；和/或(c)NGFR或EGFR细胞质尾，任选地，其中所述细胞质尾包含以下氨基酸序列：(i)KRWNRGIL(SEQIDNO:39)；或(ii)RRRHIVRK(SEQIDNO:40)；或具有多至三个氨基酸取代、添加或缺失的(i)或(ii)的变体，以及任选的回收信号，并且进一步任选地，其中所述EGFR胞外表位是截短的表皮生长因子受体(EGFRt)。2.多核苷酸，其包含编码截短的表皮生长因子受体(EGFRt)的核苷酸序列，其中所述多核苷酸进一步包含：(a)编码NGFR信号肽的核苷酸序列；和/或(b)编码包含以下氨基酸序列的多肽的核苷酸序列：(i)KRWNRGIL(SEQIDNO:39)；或(ii)RRRHIVRK(SEQIDNO:40)；或具有多至三个氨基酸取代、添加或缺失的(i)或(ii)的变体。3.权利要求1或2所述的多核苷酸，其中：(a)所述NGFR信号肽包含与SEQIDNO:4或其片段具有至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)编码所述NGFR信号肽的核苷酸序列与SEQIDNO:5或其片段具有至少70％的同一性。4.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述EGFRt包含EGFR结构域III、EGFR结构域IV和EGFR跨膜结构域。5.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述EGFRt不包含EGFR结构域I、EGFR结构域II、EGFR近膜结构域或EGFR酪氨酸激酶结构域。6.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述EGFRt包含与SEQIDNO:2或其片段具有至少70％同一性的氨基酸序列。7.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中编码所述EGFRt的核苷酸序列与SEQIDNO:3或其片段具有至少70％的同一性。8.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸：(a)编码与SEQIDNO:17或其片段具有至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)包含与SEQIDNO:16或其片段具有至少70％同一性的核苷酸序列。9.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸：(a)编码与SEQIDNO:19或21或其片段具有至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)包含与SEQIDNO:18或20或其片段具有至少70％同一性的核苷酸序列。10.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸：(a)编码与SEQIDNO:23或25或其片段具有至少70％同一性的氨基酸序列；和/或(b)包含与SEQIDNO:22或24或其片段具有至少70％同一性的核苷酸序列。11.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中编码所述EGFRt的核苷酸序列可操作地连接至弱启动子。2CN115867569A权利要求书2/2页12.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步包含转基因，任选地其中IRES元件位于所述转基因和编码所述EGFRt的核苷酸序列之间。13.前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸例如包含所述转基因和/或EGFRt编码序列的多核苷酸用于通过基因编辑插入。14.权利要求12所述的多核苷酸，其中所述转基因编码嵌合抗原受体。15.EGFRt蛋白，其由前述权利要求中任一项所述的多核苷酸编码。16.