一种固定化微生物颗粒及其制备方法及应用及包埋率检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115851531A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211542214.2C12N11/10(2006.01)(22)申请日2022.12.02C12N11/14(2006.01)C12Q1/04(2006.01)(71)申请人四川省农业科学院生物技术核技术C12R1/125(2006.01)研究所C12R1/10(2006.01)地址610000四川省成都市锦江区狮子山路106号(72)发明人王强锋夏中梅侯勇王海涛杨云月胡甦(74)专利代理机构成都立新致创知识产权代理事务所(特殊普通合伙)51277专利代理师刘俊(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12N11/04(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称一种固定化微生物颗粒及其制备方法及应用及包埋率检测方法(57)摘要本发明涉及一种固定化微生物颗粒及其制备方法及应用及包埋率检测方法，该固定化微生物颗粒是由功能菌菌粉，营养物质，辅料，以及包埋载体的构建材料组成；所述包埋载体的构建材料包括海藻酸钠、钙盐、固体酸；所述辅料包括填料；所述营养物质包括碳源、氮源；本发明的有益效果是：能实现菌剂颗粒在土壤或其他环境中遇水自动包埋固定，解决了当前固定化微生物技术步骤繁琐、生产装置复杂等问题。CN115851531ACN115851531A权利要求书1/2页1.一种固定化微生物颗粒，其特征在于，包括功能菌菌粉，营养物质，辅料，以及包埋载体的构建材料；所述包埋载体的构建材料包括海藻酸钠、钙盐、固体酸；所述辅料包括填料；所述营养物质包括碳源、氮源。2.根据权利要求1中所述的一种固定化微生物颗粒，其特征在于：以质量份计，所述功能菌菌粉为1～20份、海藻酸钠为5～30份、钙盐为5～20份、固体酸为0～40份、碳源为3～40份、氮源为2～20份、填料为10～40份。3.根据权利要求2中所述的一种固定化微生物颗粒，其特征在于：所述的功能菌菌粉包括但不限于枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌中的一种或两种。4.根据权利要求2中所述的一种固定化微生物颗粒，其特征在于：所述的钙盐为难溶性钙盐；所述难溶性钙盐包括但不限于乳酸钙、葡萄糖酸钙、EDTA‑Ca、碳酸钙、柠檬酸钙中的一种。5.根据权利要求2中所述的一种固定化微生物颗粒，其特征在于：所述的固体酸包括但不限于氨基磺酸或柠檬酸。6.根据权利要求2中所述的一种固定化微生物颗粒，其特征在于：所述的碳源为葡萄糖、蔗糖、糖蜜、甘露醇、淀粉中的一种或多种；所述的氮源为蛋白胨、黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、酵母粉、鱼粉、硫酸铵中的一种或多种。7.根据权利要求2中所述的一种固定化微生物颗粒，其特征在于：所述的填料包括但不限于硅藻土、白炭黑、淀粉、腐殖酸中的一种或多种。8.一种用于制备权利要求1～7任一项所的固定化微生物颗粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1、混合原料将功能菌菌粉、海藻酸钠、钙盐、固体酸、碳源、氮源、填料按配方比例混合均匀；步骤S2、造粒将步骤S1中混合均匀的原料放入造粒机造粒，制得固定化微生物颗粒。9.一种固定化微生物颗粒的应用，其特征在于：是将权利要求1～8任一项所述的固定化微生物颗粒放入土壤中，遇水即可生成海藻酸钙凝胶将菌体包埋，形成微胶囊包埋颗粒。10.一种固定化微生物颗粒的包埋率检测方法，其特征在于，用于测定权利要求1～9任一项所述固定化微生物颗粒的包埋率，该方法包括以下步骤：A、配制0.2mol/L的柠檬酸钠溶液，分装成数瓶，每瓶100mL，每瓶装入10～20粒瓷珠，备用；配制数瓶无菌水，每瓶100mL，备用；准备数根50mL离心管，121℃灭菌20min，冷却后备用；B、制备微胶囊包埋颗粒向灭菌后的离心管中加入10g固定化微生物颗粒，加入40mL已灭菌的无菌水，室温静置1h，得到微胶囊包埋颗粒；2CN115851531A权利要求书2/2页C、微胶囊包埋颗粒溶解将微胶囊包埋颗粒3000rpm/min离心10min，除去上清液，得到的沉淀用无菌水反复清洗3次；设置实验组、对照组，实验组：将无菌水反复清洗后的沉淀移至步骤A配制的100mL0.2mol/L的柠檬酸钠溶液中，35℃，150rpm/min振荡2h；对照组：将实验组的柠檬酸钠换成步骤A配置的无菌水，按实验组相同方式处理；D、实验组：待微胶囊包埋颗粒在0.2mol/L柠檬酸钠溶液中完全溶解后，用0.2mol/L柠檬酸钠溶液梯度稀释；取3个连续的稀释度，分别涂布于对应的选择性培养基平板上，每个稀释度重复3次，35℃培养24h；对照组：将实验组的柠檬酸钠换成无菌水，按实验组相同方式处理；E、将经步骤D处理后的实验组、对照组分别培养24h后，同一稀释度的三个