一种橙花叔醇合成酶及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115873836A(43)申请公布日2023.03.31(21)申请号202210473488.4C12R1/865(2006.01)(22)申请日2022.04.29(71)申请人武汉合生科技有限公司地址430075湖北省武汉市武汉东湖新技术开发区高新大道666号B5栋(72)发明人叶紫玲(74)专利代理机构北京植众德本知识产权代理有限公司16083专利代理师张彦彦(51)Int.Cl.C12N9/88(2006.01)C12N15/60(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12N1/19(2006.01)C12P7/04(2006.01)权利要求书2页说明书21页序列表31页附图7页(54)发明名称一种橙花叔醇合成酶及应用(57)摘要本申请公开了一种橙花叔醇合成酶及其应用，包括采用本申请的橙花叔醇合成酶的编码基因整合入核酸构建体中导入宿主细胞，获得重组菌，从而使所述编码基因在重组菌中表达，进而实现橙花叔醇的生物合成。采用本申请的重组菌和生物合成橙花叔醇的方法，橙花叔醇的产量显著提高。CN115873836ACN115873836A权利要求书1/2页1.一种橙花叔醇合成酶，其包含Pfam编号为PF01397和PF03936的结构域，且具有橙花叔醇合成酶活性。2.根据权利要求1所述的橙花叔醇合成酶，其来自除虫菊、落新妇或艾蒿。3.根据权利要求1所述的橙花叔醇合成酶，其具有与SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.11或SEQIDNO.12所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。4.一种多核苷酸分子，其包含编码权利要求1‑3中任一项所述的橙花叔醇合成酶的核苷酸序列或其互补序列的至少一种。5.根据权利要求4所述的多核苷酸分子，其包含与SEQIDNO.5、SEQIDNO.6、SEQIDNO.7、SEQIDNO.8、SEQIDNO.9或SEQIDNO.10所示的核苷酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。6.一种核酸构建体，其包含权利要求4或5所述的多核苷酸分子的至少一种。7.根据权利要求6所述的核酸构建体，其还包含编码乙酰乙酰辅酶A硫解酶、羟甲基戊二酰辅酶A合酶、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、甲羟戊酸‑5‑磷酸激酶、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶、异戊二烯焦磷酸异构酶、法尼烯焦磷酸合酶的核苷酸序列的至少一种。8.根据权利要求6或7所述的核酸构建体，所述核苷酸序列位于两个插入元件之间，所述插入元件用于将所述核苷酸序列整合入宿主细胞的基因组中。9.根据权利要求6所述的核酸构建体，其为质粒载体；优选地，所述质粒载体为真核表达载体。10.根据权利要求9所述的核酸构建体，其包括pRS426质粒骨架。11.根据权利要求10所述的核酸构建体，其为质粒载体pYR006、pYR007、pYR010、pYR013、pAra‑TPS27、pAra‑TPS28、pYR017、pYR018、pYR020、pYR021的至少一种；所述质粒载体的构建示意图如图2或图9所示。12.一种重组菌，其包含根据权利要求4或5所述的多核苷酸分子，或权利要求6‑11中任一项所述的核酸构建体。13.根据权利要求12所述的重组菌，其中，所述多核苷酸分子整合入宿主细胞的基因组中；优选地，所述宿主细胞为真核细胞；更优选为酿酒酵母。14.根据权利要求13所述的重组菌，其中，所述多核苷酸分子在所述重组菌的基因组中的拷贝数为1‑3个。15.根据权利要求12所述的重组菌，其能够内源和/或外源表达乙酰乙酰辅酶A硫解酶、羟甲基戊二酰辅酶A合酶、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、甲羟戊酸‑5‑磷酸激酶、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶、异戊二烯焦磷酸异构酶、法尼烯焦磷酸合酶的至少一种。16.根据权利要求15所述的重组菌，其中，编码乙酰乙酰辅酶A硫解酶、羟甲基戊二酰辅酶A合酶、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、甲羟戊酸‑5‑磷酸激酶、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶、异戊二烯焦磷酸异构酶和法尼烯焦磷酸合酶的核苷酸序列在所述重组菌基因组中的拷贝数各自独立地为2、2、4、2、2、2、2、2个。17.根据权利要求12所述的重组菌，其还包括FPP水解酶DPP1、FPP水解酶LPP1、柠檬酸合酶、苹果酸合酶或角鲨烯合成酶的编码基因的至少一种的下调或敲除。18.采用权利要求1‑3中任一项所述的橙花叔醇合成酶、权利要求4或5所述的多核苷酸2CN115873836A权利要求书2/2页分子、权利要求6‑11中任一