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本发明公开了一种双光程透射光谱测量血袋内游离血红蛋白含量的方法,包括:光源出光光口与光谱接收装置入射狭缝紧贴血袋且同轴,光源对血液样品透射,光谱接收装置采集透射光谱;位移平台在保证光源出光光口和光谱接收装置入射狭缝同轴前提下控制光源移动,由光谱接收装置采集透射光谱;将两个透射光谱各个波长下光强比值求对数得到吸收光谱,并归一化处理,结合化学检验的数据,建立数学模型;采集未知血液样品两位置处的透射光谱,两透射光谱的比值求对数得到的吸收光谱进行归一化带入数学模型计算,得到游离血红蛋白的含量。本发明消除了光源变化以及血袋的影响,提高了游离血红蛋白含量分析精度。