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本发明公开了一种双光程荧光光谱测量血袋内游离血红蛋白含量的方法,包括:荧光激发光源的出光光口与光谱接收装置的入射狭缝紧贴血袋且同轴,荧光激发光源对血液样品进行荧光激发,光谱接收装置采集荧光光谱;位移平台在保证荧光激发光源出光光口和光谱接收装置入射狭缝同轴前提下,控制荧光激发光源移动,采集荧光光谱;将采集到的两个荧光光谱归一化处理,结合化学检验的数据,建立数学模型;采集未知血液样品两位置处的荧光光谱并进行归一化带入数学模型,得到游离血红蛋白的含量。本发明测量针对性强,极大抑制了荧光自吸收带来的光谱非线性影响,提高了血袋内游离血红蛋白含量分析精度,解决了血袋内游离血红蛋白的无损检测问题,高效、无污染。