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本发明公开了一种纳米纤维素基荧光银纳米簇及其制备方法与应用。该制备方法包括如下步骤:(1)将纳米纤维素进行羧基化改性处理,得到含有羧基的氧化纳米纤维素;然后再进一步进行醛基化处理,得到富含羧基和醛基的氧化纳米纤维素;(2)以富含羧基和醛基的氧化纳米纤维素为还原剂和稳定剂,银氨溶液为银源,再添加保护剂,在常温条件下搅拌反应,得到纳米纤维素基荧光银纳米簇。本发明中制得的纳米纤维素基荧光银纳米簇具有良好的发光性能、抗菌性能和防霉性能,可广泛应用于化学分析、生物医疗、环境监测等领域。