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本发明涉及核酸检测试剂技术领域,且公开了一种基于荧光检测的多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用,包括核酸外切酶、缓冲液、氯化钾、氯化镁、恒温聚合酶、荧光染料、乙酸镁、探针、甘油、甜菜碱、甲酰胺、一对引物和逆转录酶,所述核酸外切酶的含量为16ng/μL?20ng/μL,缓冲液的体积含量为6%到8%,氯化钾0?200mM,氯化镁5mM?100mM,恒温聚合酶的含量为16ng/μL?20ng/μL,乙酸镁的含量为11mM?15mM。该基于多酶恒温核酸快速扩增试剂及应用,该试剂可以在常温下进行使用,且该试剂在使用时反应温度保持不变,不需要工作人员反复改变试剂的反应温度,简化了该试剂使用步骤,能够提高工作人员的工作效率,且该试剂降低了对扩增模板核酸纯度的要求,提高了该试剂的实用性。