窄孢灵芝中三萜类化合物及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115894592A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211399082.2(22)申请日2022.11.09(71)申请人中国科学院沈阳应用生态研究所地址110016辽宁省沈阳市沈河区文化路72号(72)发明人袁海生王雨曦魏玉莲秦问敏(74)专利代理机构沈阳科苑专利商标代理有限公司21002专利代理师高笑何薇(51)Int.Cl.C07J9/00(2006.01)A61K31/575(2006.01)C12P33/00(2006.01)A61P3/10(2006.01)C12R1/645(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图7页(54)发明名称窄孢灵芝中三萜类化合物及其制备方法和应用(57)摘要本发明属于医药技术领域，具体涉及药用真菌窄孢灵芝中的三萜类化合物及其制备方法及这类化合物在抗糖尿病方面的应用。该化合物具有式1所示结构，采用硅胶柱层析、ODS柱层析、HPLC等色谱方法分离得到，本发明还提供所述化合物在制备抗糖尿病药物中的应用。本发明制备方法简单，重现性好，所得化合物纯度高，具有较好的抑制α‑葡萄糖苷酶活性。CN115894592ACN115894592A权利要求书1/1页1.一种三萜类化合物，其特征在于：化合物1结构如下所示：2.一种权利要求1所述的三萜类化合物的制备方法，其特征在于：(1)种子培养基的制备：窄孢灵芝菌丝体G.angustisporum接入种子培养基，振荡培养获得种子培养液；(2)发酵：将上述种子培养液接种至大米固体发酵培养基，采用固态发酵方式进行发酵培养；(3)将(2)中发酵得到的培养物用乙酸乙酯提取3‑5次，合并提取液减压浓缩后得到浸膏，所得浸膏经硅胶柱色谱，以石油醚‑乙酸乙酯(100:1～1:1)和二氯甲烷/甲醇(50:1～1:1)系统按体积比依次进行梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯5:1至二氯甲烷/甲醇30:1的组分，所得组分经ODS柱色谱分离，以乙醇/水梯度洗脱，收集70％～90％组分，再经硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇按体积比100:1～5:1梯度洗脱，收集20:1～10:1组分，经制备型HPLC，以甲醇/水洗脱，收集110～125min的色谱峰，所得样品经半制备型HPLC色谱，以乙腈/水洗脱，收集24.1min的色谱峰得到化合物1。3.按权利要求2所述的三萜类化合物的制备方法，其特征在于：所述以乙醇/水梯度洗脱时乙醇浓度梯度为：20％，30％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，80％，90％，100％；所述制备型HPLC分离的甲醇/水洗脱时甲醇浓度为75％～80％；所述半制备型HPLC分离的乙腈/水脱时乙腈浓度为70％～75％。4.按权利要求2所述的三萜类化合物的制备方法，其特征在于：所述种子培养基的组分为：麦芽浸粉1～5g，蒸馏水100～200mL；所述振荡培养的条件为：25～28℃下，摇床转速120～200rpm，培养时间为7～10天。5.按权利要求2所述的三萜类化合物的制备方法，其特征在于：将所述种子培养液按每10～50g大米固体发酵培养基中接入1～5mL种子液的比例接种，而后静置培养直至菌丝长满基质；其中，大米固体发酵培养基为每100～250mL水中加入80～120g大米。6.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的三萜类化合物、药学上可接受的赋形剂或/和载体。7.一种权利要求1所述化合物的应用，其特征在于：所述权利要求1所示三萜类化合物或权利要求7所述的药物组合物，在制备抗糖尿病药物中的应用。2CN115894592A说明书1/5页窄孢灵芝中三萜类化合物及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于医药技术领域，具体涉及药用真菌窄孢灵芝中的三萜类化合物及其制备方法及这类化合物在抗糖尿病方面的应用。背景技术[0002]“灵芝”作为国内外最著名的药用真菌之一，隶属于担子菌门(Basidiomycota)，伞菌纲(Agaricomycetes)，多孔菌目(Polyporales)，灵芝科(Ganodermataceae)，灵芝属(GanodermaP.Karst)，其历史最早可以追溯到东汉《神农本草经》，具有补气安神，止咳平喘等功效。现代药理研究表明灵芝具有防治心血管疾病、保肝、抗肿瘤、免疫调节、抗衰老、抗菌等作用，其化学成分主要有三萜、甾体、混源萜、生物碱和多糖。然而，随着灵芝物种多样性和系统学研究的推进，灵芝属中仍有许多物种有待深入研究。其中，窄孢灵芝(Ganodermaangustisporum)为2018年发现于中国东南部的一个灵芝新种，至今未进行过化学成分及药理活性方面的研究。[0003]糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病，其发病率呈逐年上升趋势。α