一种仿生重组V型贻贝粘蛋白及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115894655A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211700258.3A61K38/17(2006.01)(22)申请日2022.12.28A61P17/00(2006.01)A61P17/02(2006.01)(71)申请人西安德诺海思医疗科技有限公司A61P17/10(2006.01)地址710000陕西省西安市沣东新城科源A61P17/06(2006.01)三路137号康鸿橙方科技园1号楼B单A61K8/64(2006.01)元1层B单元2层B单元3层A61Q5/12(2006.01)(72)发明人侯增淼魏文培郝东周浩A61Q19/00(2006.01)乔莎赵硕文张立峰李敏C12R1/84(2006.01)(74)专利代理机构西安通大专利代理有限责任公司61200专利代理师范巍(51)Int.Cl.C07K14/435(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12N1/19(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一种仿生重组V型贻贝粘蛋白及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种仿生重组V型贻贝粘蛋白及其制备方法和应用。所述的重组V型贻贝粘蛋白是由天然贻贝的Mfp‑5和构成贻贝足丝纤维骨架的蛋白融合组成。在制备过程中，将融合基因与酪氨酸酶基因共表达，并利用表达的酪氨酸酶对重组贻贝粘蛋白中的酪氨酸残基进行多巴修饰，从而获得具有生物活性的重组V型贻贝粘蛋白，并且产量高、纯度高、内毒素含量低，完全满足药品、医疗器械及化妆品领域的应用需求。CN115894655ACN115894655A权利要求书1/1页1.一种仿生重组V型贻贝粘蛋白，其特征在于：该重组V型贻贝粘蛋白包括构成贻贝足丝纤维骨架的蛋白以及与该蛋白融合表达的Mfp‑5蛋白，所述Mfp‑5蛋白的部分或全部酪氨酸残基经共表达的酪氨酸酶作用修饰为多巴基团。2.根据权利要求1所述一种仿生重组V型贻贝粘蛋白，其特征在于：所述重组V型贻贝粘蛋白中的多巴基团的质量百分含量>1％。3.根据权利要求1所述一种仿生重组V型贻贝粘蛋白，其特征在于：所述Mfp‑5蛋白为天然贻贝Mfp‑5的不同变体中的任意一种。4.根据权利要求1所述一种仿生重组V型贻贝粘蛋白，其特征在于：所述构成贻贝足丝纤维骨架的蛋白为天然贻贝preCOL‑D、preCOL‑P、preCOL‑NG、PTMP‑1、TMP‑1中的任意一种的全长蛋白或截短蛋白。5.根据权利要求1所述一种仿生重组V型贻贝粘蛋白，其特征在于：所述构成贻贝足丝纤维骨架的蛋白选自天然贻贝preCOL‑D、preCOL‑P、preCOL‑NG、PTMP‑1或TMP‑1含有的部分或全部Gly‑X‑Y结构区肽段。6.根据权利要求1所述一种仿生重组V型贻贝粘蛋白，其特征在于：与所述Mfp‑5蛋白以及构成贻贝足丝纤维骨架的蛋白共表达的酪氨酸酶来源于人、真菌或细菌。7.根据权利要求1所述一种仿生重组V型贻贝粘蛋白，其特征在于：所述重组V型贻贝粘蛋白可以在pH3～9范围内溶解稳定。8.一种贻贝粘蛋白的表达系统，其特征在于：该表达系统包括宿主菌以及位于宿主菌内的用于表达如权利要求1～7中任意一项所述的仿生重组V型贻贝粘蛋白的核酸分子。9.一种仿生重组V型贻贝粘蛋白的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将Mfp‑5蛋白以及构成贻贝足丝纤维骨架的蛋白的融合基因序列和酪氨酸酶的基因序列在宿主菌内进行共表达。10.如权利要求1～7中任意一项所述的仿生重组V型贻贝粘蛋白在制备具有促愈合功效的药品、医疗器械或化妆品中的应用。2CN115894655A说明书1/8页一种仿生重组V型贻贝粘蛋白及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于基因工程领域，涉及仿生贻贝足丝蛋白的结构设计和应用，具体涉及天然贻贝的Mfp‑5和足丝纤维骨架蛋白的融合表达及多巴修饰。背景技术[0002]贻贝粘蛋白(Musseladhesiveprotein，MAP)在贻贝足的腺体内生成和储存，又称为贻贝足丝蛋白，具有高强度、高韧性、防水性和超强的粘附性。贻贝粘蛋白的典型特征是含有大量的多巴(即3,4‑二羟基苯丙氨酸，Dopa)基团，而富含多巴基团也是贻贝粘蛋白形成粘附性的主要因素。目前已经研究并鉴定至少13种贻贝粘蛋白，包括8种粘性蛋白，即Mfp‑1、Mfp‑2、Mfp‑3F、Mfp‑3S、Mfp‑4、Mfp‑5、Mfp‑6、Mfp‑7，以及5种足丝纤维骨架蛋白，即preCOL‑D、preCOL‑P、preCOL‑NG、PTMP‑1、TMP‑1。其中preCOL‑D、preCOL‑P和preCOL‑NG主要控制贻贝足丝纤维核心骨架及其延伸；Mfp‑1覆盖在足