一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114146171A(43)申请公布日2022.03.08(21)申请号202111427009.7(74)专利代理机构广州京诺知识产权代理有限(22)申请日2021.11.28公司44407代理人于睿虬(83)生物保藏信息CCTCCNo:M202113712021.11.05(51)Int.Cl.CCTCCNo:M202113722021.11.05A61K39/102(2006.01)CCTCCNo:M202113792021.11.08A61K39/02(2006.01)CCTCCNo:M202114272021.11.15A61K39/39(2006.01)A61P11/02(2006.01)(71)申请人江苏南农高科技股份有限公司A61P29/00(2006.01)地址214400江苏省无锡市江阴市南闸镇锡澄路890号(72)发明人董彦鹏李玉峰胡静雅肖澄周琳余姣靳蒙蒙车巧林巫泉权利要求书1页说明书13页序列表2页附图1页(54)发明名称一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗及其制备方法，该疫苗由猪产毒素多杀性巴氏杆菌、猪支气管败血波氏杆菌、产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素N端和C端蛋白与一定比例的卡波姆水佐剂混合，具有较好的免疫原性、能有效预防进行性和非进行性猪萎缩性鼻炎，提高猪的产能。本发明制备的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗中除含有ZXT+Pm和AHBb抗原组分外加入rPMT‑N和rPMT‑C，除了预防由ZXT+Pm和AHBb引起的猪萎缩性鼻炎外，也避免由ZXT+Pm分泌的毒素蛋白产生的溶骨作用，加强了对猪萎缩性鼻炎的免疫保护作用。CN114146171ACN114146171A权利要求书1/1页1.一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗组合物，其特征在于，包括抗原和佐剂，所述抗原包括灭活的猪产毒素多杀性巴氏杆菌、灭活的猪支气管败血波氏杆菌、产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素N端蛋白、产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素C端蛋白；所述产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素N端蛋白的核苷酸序列为SEQIDNO:1，所述产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素C端蛋白的核苷酸序列为SEQIDNO:2。2.根据权利要求1所述的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗组合物，其特征在于，所述猪产毒素多杀性巴氏杆菌的含量不低于1×109CFU/ml，所述猪支气管败血波氏杆菌的含量不低于1×109CFU/ml，所述产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素N端蛋白的含量为10～80μg/ml，所述产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素C端蛋白的含量为10～80μg/ml，所述产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素N端蛋白与产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素C端蛋白的比例为1:1。3.根据权利要求1或2所述的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗组合物，其特征在于，所述佐剂为卡波姆水佐剂。4.一种如权利要求1至3任一项所述的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：分别优化培养猪产毒素多杀性巴氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌，培养至未进入平台期前进行灭活和去内毒素；分别克隆表达产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素N端蛋白和多杀性巴氏杆菌PMT毒素C端蛋白并进行纯化；S2：混合所述猪产毒素多杀性巴氏杆菌、猪支气管败血波氏杆菌、产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素N端蛋白多杀性巴氏杆菌PMT毒素C端蛋白和佐剂制备疫苗。5.如权利要求1至4任一项所述的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗组合物在制备预防或治疗进行性或非进行性猪萎缩性鼻炎的疫苗或药物中的应用。2CN114146171A说明书1/13页一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体为一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗及其制备方法。背景技术[0002]萎缩性鼻炎(Progressiveatrophicrhinitis，PAR)是一类慢性呼吸道疾病，以鼻腔广泛扩张和黏膜、黏膜下层及骨组织萎缩为主要特征，具有高度接触传染性，又称为传染性萎缩性鼻炎或慢性萎缩性鼻炎，是公认的严重危害集约化养猪场生产和发展的重要传染性疾病之一。PAR主要由产毒素多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌感染引起，常与其他类呼吸道疾病发生继发感染，如猪支原体病、猪蓝耳病、猪喘气病等。此病流行范围广，世界各地普遍发生，在养猪业发达地区发病率相对较高，猪群的病原检出率较高，是危害规模化养猪场的主要疾病之一，已被世界动物卫生组织列入B类疾病。因此开发更为有效、安全的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗已成为迫切的需要。[0003]目前猪萎缩性鼻炎分为进行性萎缩性鼻炎和非进行性萎缩性鼻炎，进行性萎缩性鼻炎(Progressiveatrophicrhinitis，PAR)，主要由多杀性巴氏杆菌(Pasteur