结核分枝杆菌糖脂抗原的DNA适配子及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102071204A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102071204A(43)申请公布日2011.05.25(21)申请号201010574602.X(22)申请日2010.12.06(71)申请人武汉大学地址430072湖北省武汉市武昌区珞珈山(72)发明人章晓联王其龙(74)专利代理机构武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙)42222代理人张火春(51)Int.Cl.C12N15/115(2010.01)C12Q1/68(2006.01)A61K31/7088(2006.01)A61K48/00(2006.01)A61P31/06(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页附图3页(54)发明名称结核分枝杆菌糖脂抗原的DNA适配子及其应用(57)摘要本发明公开了一种结核分枝杆菌糖脂抗原的DNA适配子，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。实验表明本发明DNA适配子Mal与结核分支杆菌作用特异性高，亲和力强，为结核病的诊断提供了新型的制剂。同时实验表明该DNA适配子能够抑制结核分枝杆菌感染，为结核病的治疗提供了一种新的途径。CN10274ACCNN110207120402071208A权利要求书1/1页1.结核分枝杆菌糖脂抗原的DNA适配子，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。2.权利要求1所述DNA适配子在制备结核病诊断试剂中的应用。3.含有权利要求1所述DNA适配子的诊断试剂。4.权利要求1所示的DNA适配子在制备治疗结核病药物中的应用。5.一种治疗结核病的药物，其含有权利要求1所述的DNA适配子。2CCNN110207120402071208A说明书1/6页结核分枝杆菌糖脂抗原的DNA适配子及其应用技术领域[0001]本发明属微生物免疫和检验领域，具体涉及一种能检测人结核分枝杆菌（MycobacteriumTuberculosis,H37Rv）[ATCC93009（4）]的单链DNA适配子。本发明还涉及该DNA适配子在结核菌表面糖脂抗原及结核病的早期诊断及治疗中的应用。背景技术[0002]目前，结核病仍然是威胁人类生命健康的主要传染病之一，也是导致人类死亡的主要因素之一。据WHO统计，目前全球约有三分之一人口虽感染结核，但没有明显临床表现。因此所导致的诊断延时及误诊是导致全球结核病的进一步传播及死亡率的上升的主要原因。目前国内外结核已有的诊断技术存在许多缺陷，缺乏特异、有效、快速、方便、廉价的诊断技术和产品，特别是一直缺乏对结核抗原的敏感早期检测手段：如过去PPD（结核菌素纯蛋白衍化物）也常用于结核病的诊断和流行病学调查,但是其缺乏特异性，敏感性低，有一定应用局限性；又如传统的痰抗酸染色的灵敏度难以达到，并且不能区分不同种类结核分枝杆菌；传统的抗体检测方法存在窗口期问题，不能达到检测目的，并且不能区分是卡介苗接种还是感染结核的问题；近些年发展的RT-PCR的诊断方法虽然特异性强，但需昂贵仪器，成本高。临床上对疑似感染结核的病人，由于缺乏有效的诊断方法，常常采用先抗结核治疗，再以治疗的效果为依据来进行诊断，如此一来浪费了大量的人力物力，也可能造成对其他疾病的误诊或是延误治疗。所以，急需探索新型诊断方法对结核病，特别是对结核菌抗原进行早期诊断，以用于结核病快速、有效、方便、廉价的特异性检测，对于及时治疗结核病人和控制结核病传染疫情都具有十分重要的意义。因此，急需开发一种快速、有效、灵敏、高特异性的结核病诊断及治疗试剂，特别是急需开发一种比临床上传统使用的抗酸染色方法更灵敏和快速地用于结核菌抗原诊断的新型试剂。[0003]脂糖是结核分枝杆菌胞壁的主要成分，大约30%结核分枝杆菌基因参与了脂类的合成和代谢。甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖（ManLAM）是主要存在于致病的人结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌以及卡介苗（BCG）胞壁中的脂糖，但由于其酰基化以及糖基化修饰的不同，不同菌种中ManLAM的结构各异，是从结构上区分各种分支杆菌的分子靶标。同时，研究表明，ManLAM可以通过抑制树突状细胞（DC）的成熟、增加免疫抑制性细胞因子如白细胞介素10（IL-10）的表达、抑制白细胞介素12（IL-12）的表达以及调节性T细胞的产生等一系列机制来抑制机体的免疫功能。[0004]SELEX（SystematicEvolutionofLigandsbyEXponentialEnrichment）筛选技术是90年代发展起来的一种新的体外筛选技术，它运用大容量的单链随机寡核苷酸文库，并结合体外PCR扩增技术，以指数富集与靶分子特异结合的寡核苷酸配基，经过多轮筛选后获得高亲和力、特异性强的寡核苷酸适配子（aptamers），具有库容量大、亲和力高、靶分子范围广等优点，已成功运用于许