一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927188A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202310079687.1(22)申请日2023.01.17(71)申请人复旦大学附属中山医院地址200032上海市徐汇区医学院路136号(72)发明人付佩尧诸炎耿子寒胡晓元钟芸诗马丽黎李全林周平红(74)专利代理机构上海申汇专利代理有限公司31001专利代理师翁若莹(51)Int.Cl.C12N5/09(2010.01)A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒(57)摘要本发明公开了一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒。本发明提供的试剂盒用于内镜来源的标本构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型，该试剂盒至少包括洗涤液、保存液和孵育液，在保存液中加入强缓冲液以保证保存环境的PH值，加入了高浓度的青链霉素和多粘菌素E，抑制细菌污染；将孵育液中加入EGF、bFGF增强了肿瘤块的活性，加入了多粘菌素E的孵育液可以增强对G‑菌的感染；本发明通过对消化液、保存液和孵育液的优化，解决了内镜标本总量小、污染多、成瘤率极低的缺陷，拓宽了消化道肿瘤PDX的建立来源，为肿瘤临床治疗及研究提供一个较理想的临床前实验动物平台，从而为改善患者的总体预后提供有力支持。CN115927188ACN115927188A权利要求书1/1页1.一种组合试剂在制备用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒中的应用，其特征在于，所述组合试剂包括：用于冲洗组织样本的洗涤液，用于保存冲洗后组织样本的保存液，以及用于孵育组织样本的孵育液，其中：所述洗涤液为每1000mL含有4mg多粘菌素E，100g氨苄青霉素，和50g链霉素的生理盐水；所述保存液的组成为：磷酸氢二钠16.5mmol/L，磷酸二氢钾1.65mmol/L，枸橼酸钾25mmol/L，枸橼酸钠25mmol/L，腺嘌呤核苷5mmol/L，1,6‑二磷酸果糖100g/L，牛血清白蛋白BSA100g/L，蛋白酶抑制剂Pepstantin1mg/L，多粘菌素E4mg/L，氨苄青霉素100g/L，链霉素50g/L，以及余量的水；所述孵育液每1000mL的组成为：DMEM培养液500mL，Matrigel胶500mL，牛血清白蛋白BSA100g/L，表皮生长因子EGF20μg/L，成纤维细胞生长因子bFGF20μg/L，多粘菌素E2mg/L，氨苄青霉素50g/L，以及链霉素25g/L；所述组织样本为内镜活检消化道肿瘤组织样本，所述消化道肿瘤为结肠癌、胃癌或食管癌。2.一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒，其特征在于，该试剂盒至少包括：用于冲洗组织样本的洗涤液，用于保存冲洗后组织样本的保存液，以及用于孵育组织样本的孵育液，其中：所述洗涤液为每1000mL含有4mg多粘菌素E，100g氨苄青霉素，和50g链霉素的生理盐水；所述保存液的组成为：磷酸氢二钠16.5mmol/L，磷酸二氢钾1.65mmol/L，枸橼酸钾25mmol/L，枸橼酸钠25mmol/L，腺嘌呤核苷5mmol/L，1,6‑二磷酸果糖100g/L，牛血清白蛋白BSA100g/L，蛋白酶抑制剂Pepstantin1mg/L，多粘菌素E4mg/L，氨苄青霉素100g/L，链霉素50g/L，以及余量的水；所述孵育液每1000mL的组成为：DMEM培养液500mL，Matrigel胶500mL，牛血清白蛋白BSA100g/L，表皮生长因子EGF20μg/L，成纤维细胞生长因子bFGF20μg/L，多粘菌素E2mg/L，氨苄青霉素50g/L，以及链霉素25g/L；所述组织样本为内镜活检消化道肿瘤组织样本，所述消化道肿瘤为结肠癌、胃癌或食管癌。2CN115927188A说明书1/5页一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒技术领域[0001]本发明涉及一种用于构建消化道肿瘤人源肿瘤异种移植动物模型的试剂盒，属于生物模型的构建技术领域。背景技术[0002]肿瘤动物模型是进行肿瘤相关机制和药物筛选研究的重要平台。目前，临床前肿瘤动物模型多采用肿瘤细胞系悬液建模的方法，它具有肿瘤细胞系易获得和实验易重复等优点。但利用肿瘤细胞系建立的肿瘤模型存在诸多缺陷。肿瘤细胞在体外建系的过程脱离了自然的肿瘤微环境，导致其基因发生改变；体外培养过程中选择性压力以及经过消化酶处理，破坏肿瘤组织及细胞异质性与原结构；细胞系所成的肿瘤缺乏原发瘤相关微环境组份。最终导致肿瘤生物学行为和自然属性不可逆性改变，严重阻碍人类对肿瘤机制及治疗应答的研究，它已成为影响肝脏癌症疗效改善的瓶颈，亟待解决。[0003]患者来源移植瘤模