寡核苷酸组合物及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106459134A(43)申请公布日2017.02.22(21)申请号201580022353.4(74)专利代理机构北京龙双利达知识产权代理有限公司1(22)申请日2015.04.291329代理人孙涛肖鹂(30)优先权数据61/987,3962014.05.01US(51)Int.Cl.62/151,9092015.04.23USC07H21/04(2006.01)C12N15/113(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N15/115(2006.01)2016.10.26(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2015/0283272015.04.29(87)PCT国际申请的公布数据WO2015/168310EN2015.11.05(71)申请人美国杰龙生物医药公司地址美国加利福尼亚州(72)发明人P·H·拉米亚权利要求书13页说明书90页序列表5页附图14页(54)发明名称寡核苷酸组合物及其制备方法(57)摘要本公开提供一种经由依次偶联循环来制备寡核苷酸的固相方法，所述方法包括二核苷酸二聚体亚基至少一次偶联于生长链的游离3'-端基。所述寡核苷酸包含至少两个通过N3′→P5′磷酰胺酯键联连接的核苷亚基。所述方法可包括以下步骤：(a)使连接于固相支撑物的末端核苷的受保护的3'氨基脱保护，所述脱保护形成游离3'氨基；(b)使所述游离3'氨基与3'-受保护的氨基-二核苷酸-5'-亚磷酰胺二聚体在亲核催化剂存在下接触以形成核苷间N3’→P5’亚磷酰胺键联；以及(c)使所述键联氧化(例如硫化)。通过主题方法产生的组合物可包含降低量的一种或多种(N-x)寡核苷酸产物。还提供包含主题寡核苷酸组合物的药物组合物。CN106459134ACN106459134A权利要求书1/13页1.一种组合物，其具有相对于化合物或其盐少于4重量份中1重量份的(N-1)产物，其中所述化合物包含具有10个或更多个核苷亚基的序列的多核苷酸，并且至少两个所述核苷亚基通过N3′→P5′磷酰胺酯亚基间键联连接。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述N3′→P5′磷酰胺酯亚基间键联是具有以下结构的N3′→P5′硫代磷酰胺酯亚基间键联：3′—NH—P(S)(OR)—O—5’其中R选自由以下组成的组：氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基和磷酸酯保护基，或其盐。3.如权利要求1-2中任一项所述的组合物，其中所述化合物包含具有10个或更多个与人端粒酶的所述RNA组分互补的核苷亚基的序列的多核苷酸。4.如权利要求3所述的组合物，其中所述多核苷酸包含含有13个或更多个与人端粒酶的所述RNA组分互补的核苷亚基的序列。5.如权利要求3所述的组合物，其中所述多核苷酸包含在3个与50个之间的与人端粒酶的所述RNA组分互补的连续核苷亚基。6.如权利要求3-5中任一项所述的组合物，其中与人端粒酶的所述RNA组分互补的所述核苷亚基均通过N3′→P5′磷酰胺酯亚基间键联连接。7.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中所述多核苷酸包含选自由以下组成的组的序列：GTTAGGGTTAG(SEQIDNO:4)、TAGGGTTAGACAA(SEQIDNO:3)和CAGTTAGGGTTAG(SEQIDNO:5)。8.如权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述多核苷酸包含3’氨基或3’-羟基端基。9.如权利要求7所述的组合物，其中所述化合物具有结构：或其盐；其中“nps”表示使一个核苷的3'-碳连接于相邻核苷的5'-碳的硫代磷酰胺酯键联—NH—P(═O)(SH)—O—。10.如权利要求9所述的组合物，其中所述盐是药学上可接受的盐。11.如权利要求7所述的组合物，其中所述化合物具有结构：2CN106459134A权利要求书2/13页其中各Mx+独立地是氢或盐的抗衡离子，各x独立地是1、2或3，且n是5至13的整数。12.如权利要求7所述的组合物，其中所述化合物具有结构：3CN106459134A权利要求书3/13页13.如权利要求1-12中任一项所述的组合物，其具有相对于所述化合物少于6重量份中1重量份的(N-1)产物。14.如权利要求13所述的组合物，其具有相对于所述化合物少于10重量份中1重量份的(N-1)产物。15.如权利要求14所述的组合物，其具有相对于所述化合物少于20重量份中1重量份的(N-1)产物。16.如权利要求1-15中任一项所述的组合物，其具有相对于所述化合物少于4重量份中1重量份的任何(N-x)产物。17.如权利要求16中任一项所述的组合物，其具有相对于所述化合物少于总共100重量份中40重量份的(N-x)含多核苷酸产物。18.如权利要求1-12中任一项所述的组合物，其具有