寡核苷酸组合物及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111228288A(43)申请公布日2020.06.05(21)申请号202010050944.5A61K31/7125(2006.01)(22)申请日2015.04.29A61K31/711(2006.01)A61P35/00(2006.01)(30)优先权数据A61K31/7088(2006.01)61/987,3962014.05.01USC07H21/04(2006.01)62/151,9092015.04.23USC07H1/00(2006.01)(62)分案原申请数据201580022353.42015.04.29(71)申请人美国杰龙生物医药公司地址美国加利福尼亚州(72)发明人P·H·拉米亚(74)专利代理机构北京龙双利达知识产权代理有限公司11329代理人孙涛肖鹂(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书102页A61K31/7084(2006.01)序列表5页附图14页(54)发明名称寡核苷酸组合物及其制备方法(57)摘要本发明涉及寡核苷酸组合物及其制备方法。本公开提供一种经由依次偶联循环来制备寡核苷酸的固相方法，所述方法包括二核苷酸二聚体亚基至少一次偶联于生长链的游离3'-端基。所述寡核苷酸包含至少两个通过N3′→P5′磷酰胺酯键联连接的核苷亚基。所述方法可包括以下步骤：(a)使连接于固相支撑物的末端核苷的受保护的3'氨基脱保护，所述脱保护形成游离3'氨基；(b)使所述游离3'氨基与3'-受保护的氨基-二核苷酸-5'-亚磷酰胺二聚体在亲核催化剂存在下接触以形成核苷间N3’→P5’亚磷酰胺键联；以及(c)使所述键联氧化(例如硫化)。还提供包含主题寡核苷酸组合物的药物组合物。CN111228288ACN111228288A权利要求书1/1页1.一种组合物，其具有相对于化合物或其盐少于4重量份中1重量份的(N-1)产物，其中所述化合物包含具有10个或更多个核苷亚基的序列的多核苷酸，并且至少两个所述核苷亚基通过N3′→P5′磷酰胺酯亚基间键联连接。2.一种化合物活性药物成分，其具有少于11重量％的(N-1)产物，其中所述化合物或其药学上可接受的盐包含具有10个或更多个与人端粒酶的RNA组分互补的核苷亚基的序列的多核苷酸，其中至少两个所述核苷亚基通过N3′→P5′磷酰胺酯亚基间键联连接。3.一种药物组合物，其包含于药学上可接受的赋形剂中配制的如权利要求1所述的组合物。4.一种合成多核苷酸的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使连接于固相支撑物的末端核苷的受保护的3'氨基脱保护，所述脱保护形成游离3'氨基；(b)使所述游离3'氨基与3'-受保护的氨基-二核苷酸磷酰胺酯-5'-亚磷酰胺二聚体在亲核催化剂存在下接触以形成核苷间N3’→P5’亚磷酰胺键联；以及(c)使所述键联氧化。5.一种二核苷酸硫代磷酰胺酯化合物，其由式(II)描述：其中：B1和B2各自独立地是嘌呤、受保护的嘌呤、嘧啶或受保护的嘧啶，或其类似物；R11是氢、保护基或亚磷酰胺基团；且R12和R13各自独立地是氢或保护基；或其盐。2CN111228288A说明书1/102页寡核苷酸组合物及其制备方法[0001]本申请是申请日为2015年04月29日、中国申请号为201580022353.4、发明名称为“寡核苷酸组合物及其制备方法”的发明申请的分案申请。[0002]相关申请的交叉引用[0003]根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2014年5月1日提交的美国临时申请序列第61/987,396号和2015年4月23日提交的美国临时申请序列第62/151,909号(代理人参考第185/002X号)的申请日的优先权，所述申请的公开内容以引用的方式并入本文。[0004]引言[0005]核酸聚合物化学已在医药、诊断和分析领域且更具体地说在反义和抗基因治疗学、组合化学、分支DNA信号放大以及基于阵列的DNA诊断学和分析中的许多开发中的技术中起作用。一些这种聚合物化学已涉及改进天然核酸聚合物如DNA的结合强度、特异性和核酸酶抗性。肽核酸(PNA)、硫代磷酸酯、甲基膦酸酯和磷酰胺酯核苷间键联是已应用至寡核苷酸以提供一种或多种期望性质如核酸酶抗性、细胞摄取和溶解性的一些聚合物化学的实例。[0006]寡核苷酸N3'→P5'磷酰胺酯可与互补DNA和RNA链形成稳定双链体，以及与DNA双链体形成稳定三链体，并且对核酸酶具有抗性。已发现寡核苷酸N3'→P5'硫代磷酰胺酯在体外和体内用作有效反义剂。例如，含有抑制端粒酶活性的化合物的寡核苷酸可用于治疗端粒酶介导的病症(如癌症)，因为癌细胞表达端粒酶活性且正常人类体细胞不具有生物学相关水平下的端粒酶活性。因此，制备和分离此类寡核苷酸的方法是令人感兴趣的。