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细菌鉴定中常用的生理生化反应生72伍国羽2007012357组别周四班2-1-1实验同组人：王甦实验时间2010年4月23日实验目的了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性；了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；学习各种接种技术。实验原理各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。实验仪器,材料和用具实验仪器：恒温培养箱。微生物材料：大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌和未知菌种的平板各1个。试剂：甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂实验用具：试管：每个试验４根试管(３根接种，1根对照)。接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔。实验步骤配置培养基葡萄糖/乳糖发酵培养基（用于葡萄糖发酵实验）蛋白胨10gNaCl2.5g水500ml制法：将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，调整pH至7.4—7.6。加葡萄糖/乳糖5g，加热溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。配好的培养基分装到试管中，每支5ml。内倒置配排净空气的杜氏小管，0.06MPa、30min灭菌。葡萄糖蛋白胨水培养基（用于甲基红和伏-普实验）蛋白胨2.5g葡萄糖2.5g磷酸氢二钾2.5g蒸馏水500ml制法：将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，调整pH至7.2，以滤纸过滤。配好的培养基分装到试管中，每支5ml。0.06MPa、30min灭菌备用。蛋白胨水培养基（用于吲哚实验）蛋白胨10gNaCl2.5g蒸馏水500ml制法：将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，调整pH至7.4-7.6。配好的培养基分装到试管中，每支5ml。0.06MPa、30min灭菌。柠檬酸铁氨培养基（用于硫化氢实验）蛋白胨10gNaCl2.5g柠檬酸铁铵0.25g硫代硫酸钠0.25g琼脂3g蒸馏水500ml制法：先用水将琼脂和蛋白胨溶化，冷却到60℃加入其他成分，溶化后加水至所需量。调整pH至7.4-7.6。配好的培养基分装到试管中，每支5ml。0.06MPa、30min灭菌。明胶培养基（用于明胶液化实验）牛肉膏2.5g蛋白胨5gNaCl2.5g明胶100g蒸馏水500ml制法：将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，调整pH至7.0。配好的培养基分装到试管中，每支5ml。0.06MPa、30min灭菌。柠檬酸盐培养基（用于柠檬酸盐利用实验）NaCl2.5gMgSO40.3gNH4H2PO40.5gK2HPO40.5g柠檬酸钠1g琼脂10g1％溴麝香草酚蓝酒精液0.5g水500ml制法：将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解(除溴麝香草酚蓝)，调整pH至6.8，以脱脂棉过滤。加入溴麝香草酚蓝混匀，配好的培养基分装到试管中，每支5ml。0.1Mpa，20min灭菌后制成斜面。接种菌种各试管按表1接种。表1.实验试管接种表试管编号实验内容123葡萄糖发酵大肠杆菌未知菌S2变形杆菌乳糖发酵变形杆菌甲基红实验产气杆菌V.P.实验产气杆菌吲哚实验产气杆菌硫化氢实验变形杆菌明胶液化实验枯草芽孢杆菌柠檬酸盐实验产气杆菌淀粉平板按下图1接种。图1淀粉水解实验接菌图练习划线法涂平板观察结果并照相实验结果与讨论图2.乳糖发酵结果图。从左至右分别为：大肠杆菌，未知菌S2，变形杆菌，对照组。图1.葡萄糖发酵结果图。从左至右分别为：大肠杆菌，未知菌S2，变形杆菌，对照组。实验结果图图4.V.P.实验结果图。从左至右分别为：大肠杆菌，未知菌S2，产气杆菌，对照组。图3.甲基红实验结果图。从左至右分别为：大肠杆菌，未知菌S2，产气杆菌，对照组。654231图9.淀粉平板实验结果图。1：对照组；2：变形杆菌；3：产气杆菌；4：枯草芽孢杆菌；5：大肠杆菌；6：未知菌。图8.柠檬酸盐实验结果图。从左至右分别为：大肠杆菌，未知菌S2，产气杆菌，对照组。图7.明胶液化实验结果图。从上至下分别为：本组同学所做的对照组，大肠杆菌，未知菌S2，枯草芽孢杆菌，其他组同学所做对照组。图6.硫化氢实验结果图。从左至右分别为：大肠杆菌，未知菌S2，变形杆菌，对照组。图5.吲哚实验结果图。从左至右分别为：大肠杆菌，未知菌S2，产气杆菌，对照组。图10.单菌落划线平板结果图。结果分析列表如下所示：试管编号实验内容123对照组葡萄糖发酵黄色，有气泡，说明可有氧分解葡萄糖浅黄色，无气泡，说明可无氧分解葡萄糖黄色，无气泡，说明可无氧分解葡萄糖紫色，无气泡，不可利用葡萄糖乳糖发酵黄色，有气泡，说明可有氧分解乳糖紫色，无气泡，说明不能分解乳糖紫色，无气泡，不可