穿膜环肽及其制备方法和用途.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115925813A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210851189.XA61P9/10(2006.01)(22)申请日2022.07.19A61P25/00(2006.01)(71)申请人青岛大学地址266000山东省青岛市市南区香港东路7号青岛大学东院区(72)发明人董铭心严志祥韩帅(74)专利代理机构青岛发思特专利商标代理有限公司37212专利代理师王晶莹(51)Int.Cl.C07K7/64(2006.01)C07K1/04(2006.01)C07K1/06(2006.01)C07K1/107(2006.01)A61K47/64(2017.01)权利要求书3页说明书17页序列表4页附图8页(54)发明名称穿膜环肽及其制备方法和用途(57)摘要本发明涉及一种穿膜环肽及其制备方法和用途，属于药物化学技术领域。所述穿膜环肽由穿膜序列、连接单元和活性序列组成，其中穿膜序列和活性序列中至少一个序列为环状结构。包括七种穿膜环肽，其氨基酸序列如SEQIDNO：2‑8所示，对应的结构式如式(Ⅰ)‑(Ⅶ)所示。本发明通过将多肽药物进行环化修饰，提高了穿膜效率、体外血浆稳定性和神经保护活性；并通过建立小鼠MCAO模型，证明可用于治疗神经损伤和脑梗死。CN115925813ACN115925813A权利要求书1/3页1.一种穿膜环肽，其特征在于：由穿膜序列、连接单元和活性序列组成，穿膜序列和活性序列中至少一个序列为环状结构。2.根据权利要求1所述的穿膜环肽，其特征在于：活性序列的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求1所述的穿膜环肽，其特征在于：包括七种穿膜环肽，其氨基酸序列如SEQIDNO：2‑8所示，对应的结构式如式(Ⅰ)‑(Ⅶ)所示：2CN115925813A权利要求书2/3页4.一种权利要求1所述穿膜环肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)树脂准备：将树脂和二氯甲烷加入反应器中溶胀后抽干；(2)脱Fmoc保护基：将20％哌啶/DMF溶液加入反应器，茚三酮检测阳性时反应完成，洗3CN115925813A权利要求书3/3页涤并抽干；(3)氨基酸活化、偶联：称取氨基酸、缩合剂和二异丙基乙胺，加入二甲基甲酰胺中溶解进行预活化，将预活化后的混合液加入反应器中，茚三酮检测阴性时反应完成，洗涤并抽干；(4)按照多肽的氨基酸序列依次连接氨基酸，保留环化前最后一个氨基酸的Fmoc保护基，连接完成后洗涤并抽干；(5)脱烯丙基、环化方法：将四(三苯基磷)钯和苯硅烷加入无水二氯甲烷中在反应器中避光条件下反应，洗涤并抽干，重复步骤(2)，称取六氟磷酸苯并三唑‑1‑基‑氧基三吡咯烷基磷、1‑羟基苯并三唑和二异丙基乙胺加入反应器，对多肽进行环化；(6)多肽切割：待树脂晾干，加入三氟乙酸、二硫代苏糖醇、去离子水进行切割，抽滤得到切割液，用三氟乙酸洗涤树脂，洗涤液合并入切割液中，加入冰叔丁基甲醚静置沉淀，离心后弃去上清，冻干，获得相应环肽粗品。5.根据权利要求4所述的穿膜环肽的制备方法，其特征在于：当树脂连接的首个氨基酸为连接单元氨基酸时，应先连接穿膜序列氨基酸，然后加入脱除剂脱除Mmt保护基，再连接活性序列氨基酸。6.根据权利要求5所述的穿膜环肽的制备方法，其特征在于：当环肽的活性序列环化时，按照步骤(4)先连接穿膜序列氨基酸，然后加入脱除剂脱除Mmt保护基，洗涤并抽干，脱除后继续按照步骤(4)‑(6)，连接活性序列氨基酸并完成环化得到相应的环肽。7.根据权利要求5所述的穿膜环肽的制备方法，其特征在于：当环肽的活性序列和穿膜序列均环化时，先完成步骤(5)穿膜序列的环化，然后加入脱除剂脱除Mmt保护基，洗涤并抽干，脱除后继续按照步骤(4)‑(6)，连接活性序列氨基酸并完成环化得到相应的环肽。8.根据权利要求5‑7任一所述的穿膜环肽的制备方法，其特征在于：脱除剂各组分质量比为三氟乙酸∶三异丙基硅烷∶二氯甲烷＝2∶4∶94。9.一种权利要求1所述穿膜环肽的用途，其特征在于：可用于治疗神经损伤和脑梗死。10.一种药物，其特征在于：其中包含治疗有效量的权利要求1所述的穿膜环肽中的一种或多种的醋酸盐、盐酸盐或其他药学上可接受的盐型。4CN115925813A说明书1/17页穿膜环肽及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明涉及一种穿膜环肽及其制备方法和用途，属于药物化学技术领域。背景技术[0002]AMPA受体是谷氨酸离子型受体，其能够通过囊泡介导的质膜插入和内化作用在细胞区室内和质膜之间调节，这些过程可以导致突触后膜上AMPA受体数量的快速变化，从而有助于表达包括长时程增强和长时程压抑两个过程。生理情况下，突触后膜AMPA受体内吞和上膜处于动态平衡状态，突触后